Optimización de una técnica de PCR convencional para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del virus del papiloma humano tipo 16

Natalia Jazmín Díaz-Ferreira; Mabel Rocío Miranda-Echagüe; María Alexandra Mercado Amarilla; Iara Magaly Martínez Pereira; Adriana Beatriz Valenzuela Cáceres; Laura Patricia Mendoza Torres; Pamela Esther Mongelós Dacunte

doi:10.18004/mem.iics/1812-9528/2022.020.02.13

El cáncer de cuello uterino es el cuarto cáncer más frecuente en mujeres en el mundo y a nivel mundial, el VPH 16 se encuentra presente en aproximadamente el 60% de los casos. A la fecha, las variantes de VPH 16 se clasifican en 4 linajes y 16 sublinajes asociándose algunas variantes con severidad de lesión. La secuenciación de la región LCR y del gen E6 es utilizada para la clasificación de variantes. Por ello, el objetivo fue optimizar 2 PCRs convencionales para detectar la región LCR y una

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... R para el gen E6. Para ello, se utilizaron muestras positivas para VPH 16, cebadores específicos para la región LCR y el gen E6. Se probaron las reacciones a diferentes temperaturas de anillamientos. La concentración de MgCl2, dNTP y cebadores fueron determinadas siguiendo las recomendaciones del fabricante de la enzima ADN polimerasa utilizada. Para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del VPH 16, se observaron mejores resultados a una temperatura de anillamiento de 57°C y 50°C, respectivamente. La concentración de MgCl2 utilizada en ambas reacciones fue de 1,5mM, la de dNTP 0,2mM y la de cebadores 0,2uM. La optimización de la reacción de PCR permitirá obtener amplicones aptos para secuenciación, a fin de determinar las variantes génicas y posteriormente evaluar funcionalidad y actividad transcripcional que puedan estar relacionadas con la patogénesis cervical.

doi:10.18004/mem.iics/1812-9528/2022.020.02.13 fatcat:eo67ntbtcvewzjtdavbeeifwha

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Natalia Jazmín Díaz-Ferreira, Mabel Rocío Miranda-Echagüe, María Alexandra Mercado Amarilla, Iara Magaly Martínez Pereira, Adriana Beatriz Valenzuela Cáceres, Laura Patricia Mendoza Torres, Pamela Esther Mongelós Dacunte. "Optimización de una técnica de PCR convencional para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del virus del papiloma humano tipo 16." Memorias del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud 20.2 (2022) 13-19

Optimización de una técnica de PCR convencional para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del virus del papiloma humano tipo 16 Optimization of a conventional PCR technique for the amplification of the LCR region and the E6 gene of human papillomavirus type 16

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Optimización de una técnica de PCR convencional para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del virus del papiloma humano tipo 16
Optimization of a conventional PCR technique for the amplification of the LCR region and the E6 gene of human papillomavirus type 16