Avaliação do ciclo celular de células tronco/progenitoras hemopoéticas da medula óssea de camundongos submetidos à desnutrição protéica [thesis]

Karina Nakajima
Avaliação do ciclo celular de células tronco/progenitoras hemopoéticas da medula óssea de camundongos submetidos à desnutrição protéica Comissão julgadora da Tese para a obtenção do grau de Doutor ____________________________ Profa. Dra. Primavera Borelli Orientadora/Presidente ____________________________ 1 o . examinador ____________________________ 2 o . examinador ____________________________ 3 o . examinador ____________________________ 4 o . examinador São Paulo ___ de ______ de 2010 4
more » ... ______ de 2010 4 DEDICATÓRIA Para minha família 5 AGRADECIMENTOS À minha família, mãe, pai e irmãos, que estiveram longe muitas vezes, mas ainda assim acreditaram no meu esforço. Espero um dia recompensar as minhas ausências... Ao Gerson Massao Kitano que nos últimos anos esteve sempre presente, me apoiando e incentivando, mas principalmente me fazendo acreditar nos meus propósitos. Obrigada por me fazer ver o mundo com outros olhos e espero tê-lo sempre comigo. À Amanda Rabello Crisma, pela ajuda em todos os momentos e, principalmente, pela amizade que me acompanhou durante todos os dias e que espero permaneça por muito tempo; com certeza não teria conseguido sem você! À Mariana Cristina Ferreira, técnica do laboratório e amiga, que sempre permaneceu ao meu lado e ajudou nas horas difíceis. Às pessoas do laboratório de Bioquímica da Nutrição pela assistência no trabalho. Ao Marco Aurélio Ramirez Vinolo, ao Ricardo Ambrósio Fock e ao Marcelo Macedo Rogero, por terem me ensinado que o trabalho é importante, mas que a amizade é primordial. À Dulce Marta Schimieguel, que apesar do pouco tempo de convivência, trouxe muitas alegrias. À Martina Rudinick e à Luciane Faine, e todas as minhas amigas da Bioquímica Clínica que sempre compartilharam as dificuldades e as alegrias. ABSTRACT NAKAJIMA, K. Hematopoietic stem/progenitor cell cycle evaluation from bone marrow of malnourished mice. 2010. Thesis (PhD) -Faculty of Pharmaceutical Sciences, University of São Paulo, Brazil, 2010. Hematopoiesis is a dynamic process governed by the microenvironment in witch it is located. Basically, the main hematopoietic tissue, the bone marrow, is composed by soluble factors such growth factors, extracellular matrix (ECM) and stromal cells, besides the hematopoietic cells. This intact inducible microenvironment is capable to control cell survival, proliferation and differentiation, inducing cell to exit a quiescent state and enter the cell cycle. However, in protein malnutrition (PM) is observed a significant reduction of hematopoietic cells, both in peripheral and central compartments. The bone marrow structural impairment due to malnutrition could harm the cell cycle signaling, a fact that could justify the establishment of pancitopenia. Therefore, in this study we set out to assess the cell cycle of hematopoietic stem/progenitors cells (HSPC) from bone marrow of malnourished mice. We used a murine model, and malnutrition induced from a low protein diet. The HPSC were obtained by immunomagnetic depletion method and used for the evaluation of cell cycle from the incorporation of propidium iodide (PI) and Acridine Orange (AO). Also, we quantified the cell cycle regulatory proteins by western blot and evaluated the expression of receptors for fibronectin, VLA4 and VLA5. Meanwhile, in ex vivo model, we evaluated the influence of growth factors and a matrix of fibronectin on the proliferation of HSPC. Considering the importance of stromal cells in cell signaling, we performed the CFU-F assay for the quantification of stromal cells and growth factors secreted. Finally, we evaluated the efficacy of nutritional recovery in the face of cell cycle alterations observed in the model of malnutrition. Briefly, we observed an impairment in the cell cycle of HSPC of undernourished mice, with an increase in this cell population in G0/G1 phase. The proteins that induce cell cycle showed a reduced LISTA DE SIGLAS
doi:10.11606/t.9.2011.tde-21012011-102527 fatcat:g5ye3rcfqvbovbff4uzwoftx7a