BACTERIAL EXPRESSION OPTIMIZATION OF HUMAN AIMP1/Р43 RECOMBINANT PROTEIN – A COMPONENT OF HUMAN MULTISYNTHETASE COMPLEX IN STRAIN OF ESCHERICHIA COLI BL21(DE3)RIL

Н. В. Воробйова, О. І. Корнелюк
2015 Mìkrobìologìâ ì Bìotehnologìâ  
Мета. Оптимізація умов бактеріальної експресії рекомбінантного білка AIMP1/ р43 людини для підвищення виходу і концентрації стабільного нативного білка у розчині. Методи. Культивування в бактеріальній системі експресії; метал-хелатувальна афінна хроматографія, гель-електрофорез. Результати. Досліджено вплив концентрації індуктора синтезу цільового білка ізопропіл-βтіогалактопіранозид (ІПТГ) на кінцевий вихід білка та визначено оптимальні температура і час культивування бактерій після додавання
more » ... ндуктора. Запропоновано оптимальну схему культивування штаму Escherichia coli BL21(DE3) RIL для досягнення високого рівня виходу рекомбінантного білка у розчинній формі. Висновки. За отриманими результатами встановлено, що кількість рекомбінантного білка AIMP1/р43 у розчинній формі суттєво підвищується при зменшенні концентрації ІПТГ до 0,5 мМ, зниженні температури культивування культури до 25 о С та збільшення часу культивування до 8 годин. Це відкриває перспективу отримання цього білка у препаративних кількостях для подальших структурних досліджень та впровадження як нового продукту молекулярної біотехнології. Ключові сл ова: білок AIMP1/р43, бактеріальна система експресії, оптимізація експресії. Сучасна молекулярна біотехнологія орієнтована на створення нових біомедичних препаратів на основі рекомбінантних білків [1]. Рекомбінантна експресія білків в E. coli є простим, швидким, недорогим і надійним методом, який дозволяє отримати цільові білки з високим виходом, що є необхідною умовою для впровадження даного метода у біотехнологічне виробництво. Однак для ефективної продукції рекомбінантних білків в бактеріальних системах необ-
doi:10.18524/2307-4663.2015.4(32).57455 fatcat:c25zlqw7ynhtvgjpxciqu4vtr4