Diskriminatorische Potenz molekularbiologischer Methoden zur Untersuchung der Epidemiologie der Coxiellose in der Schweiz

Birgit Reussner
2009
Coxiella burnetii (Cb), ein gram-negatives und obligat intrazelluläres Stäbchenbakterium, verursacht v.a. Aborte bei Hauswiederkäuern und grippeähnliche Erkrankungen beim Menschen. Die Coxiellose tritt in der Schweiz, beim Rind häufig auf. Ziel dieser Arbeit war es, molekulare Methoden zur Identifizierung und Charakterisierung von Cb an Zellkulturisolaten und Feldproben zu validieren und diese Methoden im Hinblick auf ihre Anwendbarkeit für die Routinediagnostik zu evaluieren. Zur Anwendung
more » ... n eine universelle PCR zur Amplifizierung der 16S rDNA sowie 7 verschiedene Cb-spezifische PCRs. Durch die Analyse der 16S rDNA mittels Sequenzierung konnten die Zellkulturisolate (n=87) in 7 Gruppen, die Feldproben (n=13) in 5 Gruppen eingeteilt werden. Interessanterweise war in einigen Gruppen die Homologie mit bekannten Cb-16S rDNA-Sequenzen unter 97%, was einen Hinweis auf das Auftreten von genetischen Subtypen gibt. Auch die adaA-und ISIIII-PCR eigneten sich zur Gruppierung von unseren Cb-Isolaten. Das Sporulationsgen konnte nur in 28 der untersuchten Coxiellen nachgewiesen werden. 455 Seren von kleinen Wiederkäuern aus dem Kanton Zürich wurden mittels ELISA auf Antikörper gegen Cb untersucht. Die gefundene Seroprävalenz von 1,76% zeigt, dass kleine Wiederkäuer auch in der Schweiz als potentielle Infektionsquelle für den Menschen angesehen werden können. Summary Coxiella burnetii (Cb), a small gram-negative and obligate intracellular rod, causes abortion in ruminants and influenza-like diseases in humans. In Switzerland, Coxiellosis often appears in cattle. The aim of this study was to validate molecular methods for identification and characterization of Cb-cell culture isolates and field samples and to evaluate these methods for routine diagnostics. A universal PCR for 16S rDNA amplification and seven different Cb-specific PCRs were performed. By sequencing the 16S rDNA, the cell culture isolates (n=87) were divided into 7 groups and the field samples (n=13) into 5 groups. Surprisingly, in some of these groups, the homology among the known Cb-16S rDNA sequences was less than 97%, which suggests the presence of genomic subtypes. In addition, the adaA-and ISI-III-PCR were suitable for inclusion in our Cb-isolates-grouping. The sporulation gene was detected only in 28 of the isolates examined. Sera of 455 small ruminants from the canton of Zurich were tested for antibodies against Cb by ELISA. The resulting seroprevalence of 1.76 % suggests that small ruminants are a potential infection source for humans, in Switzerland.
doi:10.5167/uzh-10046 fatcat:lsbygs2aafev7bpifygaj4w7fy