Transfection of murine dendritic cell line (JAWS II) by a nonviral transfection reagent

Shanjana Awasthi, Rebecca A. Cox
2003 BioTechniques  
Aim: To describe in detail the use of the T-REx™ System (a tetracycline-regulated mammalian expression system; Invitrogen) for rapid, easy, and eff ective generation of stable C2C12 cell clones. Tetracycline-inducible stable cell lines are useful tools to study the function of various genes in diff erent types of mammalian cells. However, the generation of stable cell lines is a time-consuming, technically diffi cult, and expensive process. Materials and methods: Generation of a stable C2C12
more » ... f a stable C2C12 cell line was performed by stable transfection of the cells with the pcDNA6/TR plasmid vector, which contains the tetracycline repressor and the blasticidin drug resistance genes. Th e establishment of the stable cell line and the effi ciency of the tetracycline-inducible gene expression system were shown with the transient transfection of reporter plasmid pTO-EGFP and observation of the GFP expression by fl uorescence microscopy. Results: We established a stable T-REx™ C2C12 cell line that can be used for muscle research studies by transfecting the gene of interest with a second plasmid. Conclusion: Th e T-REx™ system is useful in the development of stable cell lines for protein production or regulation of gene expression. C2C12 fare miyoblast hücre hattında viral olmayan transfeksiyon yöntemi ile kalıcı transfeksiyonun gerçekleştirilmesi Amaç: Tetrasiklinle uyarılabilir kalıcı hücre hatları, farklı memeli hücrelerindeki çeşitli genlerin fonksiyonunun aydınlatılması amacıyla kullanılan yararlı bir araçtır. Ancak, kalıcı hücre hatlarının oluşturulması zaman alıcı, teknik olarak zor ve pahalı bir süreçtir. Çalışmamızda, T-REx™ Systeminin (tetrasiklin ile uyarılabilir memeli gen ifade sistemi, Invitrogen) kullanılması ile hızlı, kolay ve etkin olarak kalıcı transfekte edilmiş C2C12 hücre klonlarının oluşturulması detaylı olarak anlatılmıştır. Yöntem ve gereç: Kalıcı transfekte C2C12 hücre hattının oluşturulması; tetrasiklin represör ve blastisidin ilaç direnç genlerini içeren pcDNA6/TR plazmid vektörünün hücrelere kalıcı transfeksiyonu ile gerçekleştirilmiştir. Kalıcı transfekte hücre hattının kurulumu ve tetrasiklin ile uyarılabilir gen ifade sisteminin etkinliği; pTO-EGFP plazmid vektörünün C2C12 hücrelerine geçici olarak transfeksiyonu sonrası GFP'nin ifadesinin fl oresan mikroskop ile gözlenmesi ile gösterilmiştir. Bulgular: Çalışmamızda, ilgilenilen genin ikinci bir plazmid ile transfekte edilmesi ile kas dokusu ile ilgili araştırmalarda kullanılabilecek, kalıcı T-REx™ C2C12 hücre hattı oluşturulmuştur. Sonuç: T-Rex™ sistemi ile oluşturulan kalıcı hücre hatları protein üretimi veya gen ifadesinin kontrolü için kullanılabilmektedir.
doi:10.2144/03353dd03 pmid:14513565 fatcat:survsprpfrayrja2jf7qs4xijy