Fabricação de microambientes para crescimento celular utilizando polimerização via absorção de dois fótons [thesis]

Oriana Ines Avila Salas
Primeiramente, agradeço a Deus por estar sempre ao meu lado. Agradeço em especial ao meu orientador, Prof. Dr. Cleber Renato Mendonça, pela orientação e infinita dedicação durante todos os anos em que foi meu orientador. Agradeço muito mais pelos seus valiosos conselhos, paciência e ensinamentos ao longo destes anos de mestrado. A Prof a . Dr a . Carla R. Fontana, da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da UNESP -Araraquara. Agradeço, pelos ensinamentos, pela ajuda na realização dos testes
more » ... ão dos testes biológicos feitos nesse trabalho e por todo o apoio na realização deste trabalho. Aos colegas, Otuka e Vinícius pelos ensinamentos, dedicação, dicas, ajuda, e por todo o apoio na realização deste trabalho. Ao colega Bruno, que acompanhou a fase inicial do meu trabalho e pela amizade. Agradeço a minha família, a minhas irmãs Yulibeth e Wendy, a meus pais, Rumaldo e Yulia, pelo apoio e amor. A meu marido Ruben, por todo o amor e apoio e especialmente a minha bebê com a qual aprendi que se tem que lutar por o que realmente se quer. A CAPES pelo suporte financeiro. Por fim, a todos que, direta ou indiretamente, contribuíram para a realização deste trabalho. "Se eu soubesse o que eu estava fazendo, não seria chamada pesquisa". Albert Einstein RESUMO AVILA, S. O. Fabricação de microambientes para crescimento celular utilizando polimerização via absorção de dois fótons. 2013. 85 p. Dissertação (Mestrado em Ciências) -ABSTRACT AVILA, S. O. Fabrication of micro-environments to study cell growth by twophoton absorption polymerization. 2013. 85 p. Dissertação (Mestrado em Ciências) - In this work we have demonstrated the fabrication of tridimensional microenvironments for the investigation of cell growth. Initially we have developed a two-photon absorption photopolymerization microfabrication system, which allows producing a set of microstructures with predetermined forms and spacing. This fabrication system uses femtosecond pulses from a Ti: sapphire laser operating at 790 nm. These pulses are intense enough to induce two-photon absorption by the photoinitiator, that is responsible for promoting the polymerization in an acrylic resin. The nonlinear nature of the two-photon absorption confines the excitation to the focal volume, allowing the fabrication of tridimensional structures with high spatial resolution. In order to obtain the microenvironments, it was necessary to develop a movement system for both the laser beam and the sample substrate. With this technique we have fabricated microenvironments composed by structures with different geometries (parallelepipeds, cylinders and cones) and spacing, which were characterized by optical and scanning electron microscopes. To demonstrate the feasibility of the microenvironments for the investigation of cell growth, the samples were used to monitor de development of the Michigan Cancer Foundation-7 cell (MCF-7), a lineage of breast adenocarcinoma that has a tumoral phenotype and is highly used as a model in breast cancer studies. We have observed, through conventional optical and fluorescence microscopy, the growth of the MCF-7 cells in the various microenvironments. Our results indicate a better adhesion and, therefore, better development of cells on the cylindrical microstructures. We also observe a higher cell density in the microenvironments with microstructures having a spacing of 12 m, which reduces as the distance between microstructures increases, in such a way that for the microenvironment with 30 m spacing, for example, just a few cells are observed. Thus, our results demonstrate that the produced microenvironments are applicable in deeper studies in microbiology, with potential application in tissue engineering.
doi:10.11606/d.76.2013.tde-20122013-151051 fatcat:eziwbzmhvjeg3odziqxtts3svq