Введение. Соединения daNTP проявляют свойства эффективных ингибиторов синтеза ДНК in vitro, катализируемого ДНК-полимеразой I из Е. coli и ДНК-полимеразами эукариот (а -из тимуса теленка и βиз печени крыс) [1]. Механизм ингибирования ферментативного синтеза ДНК при действии daNTP состоит в конкуренции daNTP с природными субстратами dNTP (в соответствии с природой основания) за включение в растущую цепь ДНК. После включения остатков 2', З'-дидезокси-3'-амино-5'-монофосфатов в З'-конец растущей

more »

... пи присоединение следующих звеньев по аминогруппе З'-концевого нуклеотидного остатка не осуществляется. Таким образом, daNTP оказались эффективными терминаторами синтеза ДНК, катализируемого репликативной ДНК-полимеразой а и репаративной ДНК-полимеразой β млекопитающих [1]. Ранее терминирующие свойства при катализе синтеза ДНК ДНК-полимеразой I из Е. coli были показаны для ddNTP [2]. Именно это свойство терминировать синтез цепей ДНК позволило использовать ddNTP [3, 4] и daNTP [1] для установления последовательности нуклеотидов в ДНК полимеризационным методом. Нами показано также, что 2% З'-дидезокси-З'-аминонуклеозиды ингибируют репликативный синтез ДНК в эмбрионах морских ежей, хотя молекулярный механизм этого ингибирования еще не изучен [5] . В то же время в опытах на ядрах эмбрионов морских ежей обнаружено [6], что daNTP ингибируют синтез фрагментов Оказаки столь же эффективно, как и агаТТР -известный ингибитор репликативного синтеза ДНК in vitro с ферментами из млекопитающих [7] . В этой статье сообщается, что daNTP ингибируют синтез ДНК в уоблученном хроматине из покоящихся клеток печени (G 0 ) крыс in vitro. Хроматин неделящихся клеток выбран нами в первую очередь как объект, в котором синтез ДНК катализируется ДНК-полимеразой β, так как ДНК-полимераза α отмывается при выделении ядер и хроматина [8, 9] . Как упоминалось выше, для очищенной ДНК-полимеразы β уже проведено исследование с daNTP [1]. Кроме того, γ-облучение вызывает в ДНК образование брешей очень малых размеров [10-12], которые не могут репарироваться ДНК-полимеразой а и таким образом дополнительно гарантируется участие исключительно ДНК-полимеразы β. Измеряемый в настоящей работе синтез является репаративным, Принятые сокращения: dNTP -2'-дезоксинуклеозид-5'-трифосфаты с основаниями аденин (dATP), цитозин (dCTP), гуанин (dGTP) и тимин (dTTP); daNTP -2',3'-дидезокси-З'-аминонуклеозид-Б'-трифосфаты с основаниями соответственно аденин (daATP), цитозин (daCTP), гуанин (daGTP) и тимин (daTTP); d(az)TTP -2',3'-дидезокси-3'азидотимидин-5'-трифосфат; ddTTP -2',3'-дидезоксинуклеозид-5'-трифосфаты с основаниями аденин (ddATP), цитозин (ddCTP), гуанин (ddGTP) и тимин (ddTTP); araTTP -1 -(в-Э-арабинофуранозил) -тимин-5'-трифосфат.