Efeito da senescência reprodutiva sobre aspectos morfológicos, funcionais e de estresse oxidativo do sêmen fresco e criopreservado de cães [thesis]

Maíra Morales Brito
DEDICATÓRIA À minha mãe, sempre guerreira, À minha tia Eliana, minha prima Biba e meu tio Chris, meus companheiros à distância, Aos meus amigos e amigas, a família que escolhi, Ao meu amor e confidente, E aos meus mestres que me ajudaram nesta jornada. "O meu mundo não é como o dos outros, quero demais, exijo demais; há em mim uma sede de infinito, uma angústia constante que eu nem mesma compreendo, pois estou longe de ser uma pessimista; sou antes uma exaltada, com uma alma intensa, violenta,
more » ... intensa, violenta, atormentada, uma alma que não se sente bem onde está, que tem saudade... sei lá de quê!" (Florbela Espanca) AGRADECIMENTOS Os finais sempre nos remetem ao começo. E os começos sempre vêm cheios de novidades. Entrar na pós-graduação foi um novo mundo, cheio de esperança, renovação, força de vontade e de... medos e incertezas. Cada um sabe o que passa para trilhar seu próprio caminho, cada um sabe as passagens que seguiu e as consequências das escolhas feitas. Mas chegar aqui traz como resultado um saldo infinito de novos conhecimentos, novos contatos, novas amizades, novas experiências e, acima de tudo, uma nova Maíra. Se hoje alcancei mais esta conquista, certamente não foi sozinha e aqui me reservo o direito de agradecer a todos que deram suas contribuições ao longo dessa jornada. Em primeiro lugar, agradeço à minha mãe, quem me acompanhou lado a lado nesses 25 anos de turbulência de voo. Independente dos momentos de dificuldade e incerteza ela esteve aqui, bem perto de mim, me dando todo amor e conforto que eu poderia receber. Mãe, se tem alguém em quem eu me espelho como exemplo de coragem, de caráter e de amor e amizade incondicionais, essa pessoa é você. Pode ter certeza que farei de tudo para que as coisas continuem caminhando e que sempre estarei aqui para você, assim como você sempre esteve aqui para mim. Continuemos sendo fortes como sempre fomos, coisas cada vez melhores estão a caminho e isso é só o começo, temos muito o que aproveitar e ser felizes. Família a gente não escolhe, mas não sei se por sorte ou por escolha de espíritos, tive o imensurável contentamento e alegria em partilhar do mesmo sangue que duas mulheres de peito. Minha tia Eliana e minha prima Gabriela, companheiras de uma vida inteira. Já disse e repito novamente: dizem que antes de nascermos nós escolhemos a qual família queremos pertencer nesta vida, eu diria que não poderia ter feito escolha melhor. Muito obrigada por fazerem tanto e tudo por mim. Hoje eu sou quem eu sou porque sempre tive o apoio e amparo de uma segunda mãe e uma irmã. Isso não começou nesta vida e nem termina por aqui, nossa ligação é muito mais forte do que os sentimentos mundanos. Mais feliz ainda sou eu, que pude ter a oportunidade de ter um tio inglês com tamanho zelo, dedicação, educação e empatia. Transmito aqui meus agradecimentos ao meu tio Chris. Uncle Chris, even from a distance, I know I can count on you, in all those years I could not have anyone better as an uncle, thank you for everything and wait for me for a tour in England. Obrigada por tudo, eu amo vocês incondicionalmente. Os anos que se passaram foram em diversas ocasiões bastante turbulentos, mas me trouxeram alguém muito especial. Dentre as idas e vindas dessa maré de lua cheia, recebi um presente iluminado. Alguém que me traz força, que faz de mim uma pessoa melhor e que está sempre ao meu lado, me ajudando e contribuindo para dias mais leves e alegres. Lucas, amorzinho, pius ou pitotinho, você chegou num momento em que eu estava no meio de um labirinto e foi você quem me trouxe a luz e permaneceu comigo buscando o caminho. Tenho certeza de que muito chão ainda está por vir e, ainda bem, este é só o começo. Eu te amo infinitamente e só tenho a agradecer por ter você junto de mim. Você faz meus dias melhores e eu já não me vejo mais sem você. Ainda sobre a família, há aqueles em que não dividimos sangue, mas dividimos alma. Estas são minhas mais do que amigas. distância e dos trajetos diferentes, nossa união não tem mais fim. Agradeço cada momento e cada risada compartilhada com vocês. Não poderia deixar de fora meu querido LIAPP. Este lugar foi onde aprendi grande parte de tudo que sei e é a este grupo a quem devo todos os resultados aqui contidos. Muito obrigada ao Dani, Rê (♀), Rê (♂), Lê, Thay, Clau, à antiga geração Cris, Li, Fê e Gi, às ICs Ana Bia, Biazinha, Bia, Isa, Gi e Carol, ao Daneba (que é quase LIAPPano) e aos nossos estagiários, em especial a Ana. Aproveito o momento para agradecer aos demais pós graduandos do VRA, mas em especial aos do LA e do GEMA: Brunão, Giulia, Diego, Nívea e Andressa. Agradeço aos institutos e laboratórios que possibilitaram a realização do meu trabalho: Laboratório de Farmacologia Aplicada e Toxicologia, em especial para a Nicolle e Professora Cristina Massoco; IPENmais especificamente ao laboratório Andrologia. Sem a ajuda de vocês eu estaria perdida! Finalmente, agradeço à pessoa que topou viver essa loucura junto comigo. Professora Camila, ou simplesmente Pro, muito obrigada por todos os ensinamentos, todas as lições, todas as conversas no banco de vaquinha, todas as oportunidades e todas as conquistas compartilhadas. Sem dúvida alguma foi uma experiência muito profunda partilhar com você uma trajetória de ensinamentos e pesquisas. Muito obrigada por todo acolhimento, toda paciência, todo carinho e por todo tempo dedicado a mim, mesmo quando os assuntos não diziam respeito à pós graduação e projetos. Agradeço imensamente a segunda casa que tive nesses anos todos. A FMVZ certamente me trouxe muita coisa e não poderia ficar de fora. Em especial, gostaria de agradecer alguns professores que, mais do que ministrar conteúdos obrigatórios, transbordam a arte e a paixão por ensinar, representados aqui pela Professora Claudia, Professora Mayra e Professor Marcilio. Mais especificamente ainda, agradeço ao VRA pela oportunidade deste mestrado, um departamento sem dúvidas muito caloroso. Agradeço a todos os professores e funcionários, mas em especial, agradeço à Roberta, Loide, Harumi, Professor Ricardo, Ira, Camilla e Priscilla. Por fim, agradeço à USP, aos funcionários da pós graduação e a CAPES e a FAPESP pelo auxílio financeiro. "O agradecimento é a memória do coração" -Lao Tse Birds flying high you know how I feel Sun in the sky you know how I feel Reeds drifting on by you know how I feel It's a new dawn it's a new day it's a new life for me And I'm feeling good Fish in the sea you know how I feel River running free you know how I feel Blossom in the trees you know how I feel It's a new dawn it's a new day it's a new life for me And I'm feeling good Dragonflies all out in the sun You know what I mean, don't you know Butterflies are all having fun You know what I mean Sleep in peace When the day is done And this old world is a new world and a bold world for me Stars when you shine you know how I feel Scent of the pine you know how I feel Yeah freedom is mine And you know how I feel It's a new dawn it's a new day it's a new life for me Butterflies, ooh Oh, ooh... Ooooh... Freer than you... Ooooh Feeling good Abstract Brito, M. M. Efeitos da senescência reprodutiva sobre parâmetros do sêmen fresco e criopreservado de cães. [Reproductive senescence effects on fresh and cryopreserved dog's semen parameters]. 2017. Dissertação (Mestrado em Ciências) -Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2017. This study aimed to compare the semen of young and senile dogs, through the evaluation of morphological and functional attributes, oxidative stress and quantification of advanced glycation ending products (AGEs); compare the seminal freezability of young and senile dogs and evaluate the effects of advanced glycation ending products, oxidation protein and oxidative stress on seminal cryopreservation of senile dogs. Twenty two dogs were selected and allocated into two experimental groups according to their age: Young Group (n=11) and Senile Group (n=11). These groups were additionally divided into Fresh Semen Group and Frozen Semen Group. Age distribution was performed according to the size of the animals, being small animals considered senile from 8 years of age onwards, medium size from 7 years old and large size over 6 years old. Regardless of the body size, dogs were considered young if they were at reproductive maturity from 1 to 5 years old. The Fresh Group was subjected to immediate seminal assessments, including volume, color, aspect of the ejaculate, sperm concentration and computer analysis of sperm motility (CASA). Then morpho-functional assessments were carried out, including sperm mitochondrial activity, lipid oxidative stress, protein oxidative stress, dosage of advanced glycation ending products and of protein concentration, flow cytometry using fluorescent probes to evaluate plasmatic and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation analysis. The semen from the Frozen Group was submitted to one step freezing protocol and samples were thawed after not less than 1 week at 37°C for 30 seconds and evaluated for sperm concentration, motility computerized analysis (CASA) and same the morphofunctional analysis performed for the Young Group. Male dogs from the Young Group presented higher libido score, parameters of sperm motility, percentage of sperm with high mitochondrial activity and lower percentage of sperm of medium mitochondrial activity, total spermatic defects, major spermatic defects and proximal cytoplasmic droplet. For the fresh semen of the Young Group, higher values of acrosomal
doi:10.11606/d.10.2017.tde-24042017-173840 fatcat:6wgokhxcwvaqfadyp6bod6rk64