A comparison of different cryoprotectant solutions and thawing methods for cryo­preservation of embryos of mice and rats

T. N. Igonina, E. Yu. Brusentsev, I. N. Rozhkova, V. A. Naprimerov, S. Ya. Amstislavsky
2015 Vavilov Journal of Genetics and Breeding  
The �ro�er choice of cryo�rotectant and thawing method affects cryo�reservation efficiency. a freezingthawing method for s�aring embryonic cells was evaluated in ex�eriments with icr mice. cleavagestage embryos of icr mice�� Gc rats�� and oXYS rats were collected on Day 3 of �regnancy and frozen in �lastic straws according to a standard �rotocol. Permeating (ethylene glycol and glycerol� and non�ermeating (sucrose� cryo�rotectants and their combinations were com�ared during the freezing of icr
more » ... he freezing of icr mouse embryos. with these mice�� two thawing methods were com�ared�� ra�id (water bath�� 10 s�� 3� °С� and slow (40 s�� room tem�erature; 40 s�� 30 °С�. Embryo viability in mice and rats was evaluated by their in vitro culturing after thawing. our data on mice indicate that slow thawing is more suitable for s�aring the integrity of embryonic cells; moreover�� su��lementation of the main cryo�rotectant (either ethylene glycol or glycerol� with sucrose is beneficial for subsequent in vitro culture�� es�ecially in the case of glycerol. This freezing-thawing �rotocol (with glycerol and sucrose as cryo�rotectant agents and slow thawing� was a��lied to rats of the Gc and oXYS strains; the survival rate after cryo�reservation was 6�-�3.3 %�� and the rate of in vitro develo�ment was 64.�-66.6 %. Вы�ор криопротектора�� спосо�а оттаивания эм�рионов влияет на эффективност�� процесса криоконсервации. cпосо� замораживания и оттаивания эм�рионов�� нацеленный на сохранение �ластомеров�� �ыл подо�ран на мышах линии icr. В ра�оте полу�али эм�рионы мышей линии icr�� а также крыс линий Gc и oXYS на стадии дро�ящихся зародышей на третий ден�� после спаривания и производили их замораживание по стандартной программе в пластиковых соломинах. На мышах icr cравнивали влияние проника�щих (этиленгликол���� глицерин� и не проника�щих (сахароза� криопротекторов в их ком�инации на выживание эм�рионов после замораживания. В этом же эксперименте сравнивали �олее �ыстрый (10 с на водяной �ане при 3� °С� и �олее медленный (40 с при комнатной температуре�� затем 40 с на водяной �ане при 30 °С� спосо�ы оттаивания зародышей. жизнеспосо�ност�� эм�рионов мышей и крыс после процедур криоконсервации оценивалас�� путем их кул��тивирования in vitro. Наши данные�� полу�енные на мышах�� свидетел��ству�т о том�� �то «медленное» оттаивание лу�ше подходит для выживания эм�рионов�� �ем «�ыстрое» оттаивание; до�авление сахарозы к основному криопротектору (этиленгликол� или глицерину� улу�шает показатели развития эм�рионов in vitro после оттаивания�� осо�енно когда криопротектором является глицерин. Именно этот спосо� замораживания -оттаивания эм�рионов (глицерин с сахарозой в ка�естве криопротекторов�� «медленное» оттаивание� �ыл испол��зован при ра�оте с крысами линий Gc и oXYS�� при этом 6�-�3��3 % всех зародышей успешно пережили криоконсерваци��� из них 64���-66��6 % -успешно развивалис�� в кул��туре. ��л��евые слова�� мыши icr; крысы Gc; oXYS; криоконсервация эм�рионов; этиленгликол��; глицерин; сахароза.
doi:10.18699/vj15.047 fatcat:fjktagy4qzcy7gi7qg5vhkdx7a