Modulação promovida pelo peptídeo natriurético tipo C sobre a resposta contrátil induzida pela fenilefrina em aorta torácica e artéria mesentérica de resistência isoladas de ratos submetidos ao choque séptico [thesis]

Laena Pernomian
DEDICATÓRIA Aos meus pais, Luiz Antônio Pernomian e Eli Conceição Paraizo Pernomian, por todo o amor e dedicação empenhados para a realização dessa difícil conquista, durante todos esses anos. A minha irmã, Larissa Pernomian, pelo amor, apoio e compreensão em todos os momentos da minha vida, sendo sempre o meu exemplo e guia. Ao meu namorado, Alejandro Ferraz do Prado, que sempre esteve ao meu lado em todos os momentos, me apoiando, acreditando em mim e me dando forças para continuar em frente.
more » ... ontinuar em frente. In memoriam de Luana Pernomian, luz que ilumina e guarda nossos caminhos. AGRADECIMENTOS A Deus pela graça da vida e por todas as alegrias e experiências vividas ao longo desses anos. Por ter me dado paciência e sabedoria diante de todos os desafios. Aos meus pais, Luiz Antônio e Eli, pelo amor, carinho, apoio, dedicação integral e ensinamentos que me proporcionaram, não medindo esforços para que eu conseguisse alcançar meus objetivos sempre com muita coragem e força para vencer os obstáculos que surgissem em meu caminho. A minha irmã Larissa, que sempre esteve ao meu lado, sendo meu exemplo de vida, me protegendo quando era preciso, me ajudando nos momentos difíceis, compartilhando alegrias e tristezas, sendo minha companhia e por todos os ensinamentos durante toda a vida. Ao meu namorado Alejandro, que por tantas vezes esteve ao meu lado trabalhando e me ensinando, compartilhando comigo medos e incertezas, pelo apoio nas horas desafiadoras, pelo abraço nos momentos difíceis, pelo amor e carinho ao longo de todos esses dias. A minha orientadora, Prof.ª Dr.ª Lusiane Maria Bendhack, pelas oportunidades de aprendizado e crescimento pessoal e profissional, pela dedicação e confiança que foram essenciais para o desenvolvimento deste trabalho. Aos meus grandes amigos Deidiane, Vitor, Vinícius, Bruno, Tiago, Mayara, Aline, Carol, Ana Carolina, Prycila e Fernanda que foram muito mais que companheiros de laboratório, foram grandes pessoas que estiveram comigo sempre, que eu pude contar em todas as horas, que realmente trouxeram alegria e tranquilidade em minha vida. Aos colegas de laboratório e Rodrigues e às suas técnicas de laboratório Milene e Val, do Departamento de Fisiologia da FMRP-USP, que foram muito atenciosos e não mediram esforços para a realização dos experimentos de dosagem plasmática de CNP por radioimunoensaio. À Professora Munira M. A. Baqui que atendeu prontamente ao pedido de ajuda na padronização da separação de frações celulares. À Aline de Azevedo que participou dos experimentos de padronização e quantificação de RNAm por real-time PCR. Ao Lucas César Pinheiro que sempre esteve disposto a realizar as colaborações referentes à dosagem de metabólitos de NO e o ensaio de lucigenina. À técnica do Laboratório de Microscopia Confocal -LMMC (Processo FAPESP n° 2004/08868-0) Elizabete Rosa, que sempre esteve pronta para compartilhar seu conhecimento e ajudar nas padronizações que fossem necessárias. À técnica do Laboratório de Citometria de Fluxo (Processo FAPESP n° 04/09448-5) Fabiana, pela ajuda nos experimentos e também pela amizade de sempre. À Professora Raquel Fernanda Gerlach por ter aberto as portas do seu laboratório, permitindo a execução de inúmeros experimentos. Aos Professores membros da banca, titulares e suplentes, Michele M. Castro, José (FAPESP), processo número 2011/11.205-7. Ao CNPq e CAPES. Palavras-chave: Peptídeo natriurético tipo C -fenilefrina -choque séptico -endotélio vascular -estresse oxidativo -disfunção cardíaca. ABSTRACT Laena Pernomian. C-type natriuretic peptide-induced modulation over the phenylephrine-induced contraction on thoracic aorta and resistance mesenteric arteries isolated from septic shock rats. 2015. Thesis (PhD degree) -School of Medicine from Ribeirão Preto, Universidade of São Paulo, Ribeirão Preto, 2015. Septic shock is a systemic inflammatory syndrome secondary to an infection which the vascular dysfunction leads to an insufficient blood flow to vital organs with systemic hypotension, multiple organ injury and death. Usually, in septic shock patients there is an imbalance on hemodynamic factors, leading to low cardiac output and vasodilation, with decrease on contractile responses to several agonists, which the contribution of nitric oxide (NO), NO-synthases (NOS) and oxidative stress are evident. The contribution of natriuretic peptide system is observed on patients and animals submitted to severe sepsis or septic shock. C-type natriuretic peptide (CNP) is a vasodilator that leads to vascular relaxation through cGMP, NO, vascular smooth muscle hyperpolarization and reduction in cytosolic calcium. Treatment of animals with NPR-A/B antagonist, as well as knockout mice to NPR-A receptor are less susceptible to sepsis, with less hypotension, enhanced contraction to different agonists and reduction in inflammation and plasma NO. Therefore, the hypothesis of the present work is in septic shock induced by cecal ligation and puncture (CLP) model in rats there is low vasoconstriction to the selective α1adrenoceptor agonist Phenylephrine (PE) and this effect could be attenuated by the inhibition of CNP signaling, strongly modulated by the oxidative stress. CLP survival was lower than the control rats (Sham) and cardiovascular parameters were impaired in CLP compared to the Sham rats. PE had positive pressure effect lower in CLP than in Sham rats. CNP induced hypotension in both groups with greater increases of cardiac rate in CLP. PE-induced contraction was decreased in aorta and resistance mesenteric artery isolated from CLP rats and this effect was modulated by the vascular endothelium. CNP-induced vasodilation was lower in rat aorta of CLP. Moreover, CNP had a negative modulator effect over the PE contraction on aortas with or without endothelium, but not on resistance mesenteric artery isolated from Sham and CLP rats. The low contractile response induced by PE on CLP aortas was enhanced by NPR-B antagonist, and by NOS, xanthine oxidase or extracellular matrix metalloproteinases (MMPs) inhibition on aortas with endothelium. The negative modulation induced by CNP over the PE contraction was reversed by the presence of NPR-B antagonist, NOS inhibition, and by the decrease on O2availability and H2O2 degradation in both groups. Furthermore, oxidative stress and H2O2 intracellular content were greater on vascular smooth muscle of CLP rats. Protein expression of endogenous CNP was lower on endothelium and greater on smooth muscle of aortas isolated from CLP compared to Sham rats. However, the protein expression of α1-adrenoceptor and NPR-B were not different between the groups, but the protein expression of NPR-C was lower on smooth muscle of CLP aortas. Intracellular calcium mobilization was decreased on vascular smooth muscle of CLP aortas and extracellular high potassium solution was not able to depolarize smooth muscle layer of CLP aortas. Protein expression of NPR-B and NR-C were not different on CLP hearts. However, membrane potential of left ventricle (LV) of CLP was lower than in Sham rats. Besides, intracellular calcium content of LV of CLP was lower than Sham rats but the decrease on cytosolic calcium induced by CNP was greater on LV of CLP compared to the Sham rats. There was cardiac dysfunction on CLP rats. In rat CLP septic shock model, the role of natriuretic peptide, mainly CNP, is of great importance in the decreased α1-adrenoceptor contraction, representing a potential via of intervention on severe sepsis and septic shock.
doi:10.11606/t.17.2016.tde-08092015-153836 fatcat:g2nwgdgruvc37jexouxfigzapa