1 Кафедра генетики и биотехнологии Санкт-Петербургского государственного университета; 2 Санкт-Петербургский филиал Института общей генетики им. Н. И. Вавилова РАН Для поиска белков, взаимодействующих с фактором терминации трансляции eRF1, кодируемых у дрожжей Saccharomyces сerevisiae геном SUP45, проводили скрининг библиотеки дрожжевых генов на мультикопийной плазмиде. Этот подход позволил выявить ген EсM23, увеличение экспрессии которого приводило к понижению жизнеспособности нонсенсмутантов

more »

... up45. Сверхэкспрессия этого гена приводила также к антисупрессорному эффекту, не влияя при этом на количество белка eRF1 в клетке. Обсуждаются возможные механизмы влияния гена EсM23 на жизнеспособность нонсенс-мутантов по гену SUP45. Ключевые слова: терминация трансляции; дрожжи; нонсенссупрессия; SUP45; eRF1; eRF3. Поиск новых факторов, влияющих на Процесс терминации трансляции у дрожжей SaccharomyceS cereviSiae Поступила в редакцию 06.11.2012 Принята к публикации 10.01.2012 ВВЕДЕНИЕ Изучение путей регуляции различных клеточных процессов является ключевым направлением современной молекулярной биологии. Для поиска белковых факторов-регуляторов, оказывающих прямое или опосредованное влияние на работу других белков, в настоящее время используются различные подходы. Терминация трансляции является заключительным этапом биосинтеза белка. Ключевым моментом при терминации трансляции является попадание стоп-кодона мРНК в А-участок рибосомы, в результате чего происходит гидролиз связи между тРНК и полипептидом и освобождение белка. Белковыми компонентами данного процесса являются факторы терминации I и II класса. Факторы терминации трансляции I класса узнают стопкодон в А-участке рибосомы. К ним относятся RF1 и RF2 у прокариот, а также eRF1 у эукариот. Факторы терминации II класса, к которым относятся RF3 у прокариот и eRF3 у эукариот, при участии ГТФ активизируют процесс терминации трансляции (см. обзоры: Inge-Vechtomov et al., 2003; Kisselev et al., 2003) . Фактор eRF1 распознает любой из трех стоп-кодонов (UAA, UAG или UGA) при его попадании в А-сайт рибосомы, что приводит к гидролизу связи пептидил-тРНК (Frolova et al., 1994) . Фактор eRF3 является ГТФазой и стимулирует активность фактора eRF1, таким образом обеспечивая высвобождение новосинтезированной полипептидной цепи с рибосомы (Zhouravleva et al., 1995; Frolova et al., 1996) . Для осуществления процесса терминации трансляции необходимо взаимодействие белков eRF1 и eRF3 (Stansfield et al., 1995; Zhouravleva et al., 1995) . У дрожжей Saccharomyces сerevisiae фактор терминации трансляции eRF1 кодируется геном SUP45 (Himmelfarb et al., 1985; Breining et al., 1986) , а фактор eRF3 -геном SUP35 (Kushnirov et al., 1988) . Несмотря на то, что SUP35 и SUP45 являются жизненно важными для клетки, была показана возможность возникновения нонсенс-мутаций в этих генах (Stansfield et al., 1996; Moskalenko et al., 2003; Chabels kaya et al., 2004). Такие мутации, не являясь летальными, приводят к нарушению терминации трансляции. За последние несколько лет значительный прогресс произошел в области изучения неканонических функций белков eRF1 и eRF3. Использование биохимических, генетических и молекулярно-биологических методов позволило идентифицировать ряд белков, взаимодействующих с факторами терминации трансляции. Посредством таких взаимодействий возможна координация терминации трансляции с другими клеточными процессами. Высокий уровень сходства аминокислотных последовательностей как eRF1, так и eRF3, в различных систематических группах эукариот предполагает сходство механизмов терминации трансляции. Целью данной работы является поиск новых факторов, влияющих на процесс терминации трансляции у дрожжей S. cerevisiae.