Charakterisierung des Proteins Peter Pan in HeLa-Zellen
[thesis]
Maria Theresia Meyer, Universität Ulm
2021
Das Protein Peter Pan (PPAN) lokalisiert in Nukleoli und Mitochondrien von HeLa-Zellen. Seine bekannten Funktionen liegen in der Beteiligung an der Ribosomenbiogenese und seiner anti-apoptotischen Wirkung, die für die Proliferation von Zellen wichtig ist. Außerdem ist PPAN ein Zielprotein des Wnt-Signalweges, der in der Entstehung von Tumoren eine wichtige Rolle spielt. In einer Immunfluoreszenzfärbung ist im Rahmen dieses Projekts eine neue Lokalisation von PPAN im midbody von HeLa-Zellen
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... ckt worden. Diese kann in weiteren Immunfluoreszenzfärbungen bestätigt werden. Der midbody ist eine Zellorganelle, die ab der Anaphase der Mitose aus der midzone entsteht. Die midzone bezeichnet den Bereich in der Mitte der interzellulären Brücke aus Mikrotubuli, die die Tochterzellen bis zu ihrer endgültigen Trennung miteinander verbindet. Die Trennung wird auch als Abschnürung bezeichnet. Der midbody enthält Proteine, die für eine erfolgreiche Abschnürung der Tochterzellen essentiell sind. Nach der Abschnürung wird der midbody-Rest von einer Zelle internalisiert und verleiht ihr proliferatives Potential bis er letztendlich über Autophagie abgebaut wird. Das Ziel dieser Dissertation besteht darin, mit Hilfe von weiteren Immunfluoreszenzfärbungen und Western-Blot-Experimenten Genaueres über PPAN und seine neu entdeckte Lokalisation herauszufinden. Transfektionsexperimente mithilfe von PPAN-siRNA geben Aufschluss darüber, welche Effekte der Verlust von PPAN auf Zellen besitzt. Im midbody zeigt sich nach knockdown von PPAN in ca. 40 % der Fälle eine Fehllokalisation von mitotic kinesin like protein-1 (MKLP-1). Bei MKLP-1 handelt es sich um ein wichtiges midbody-Protein, das für die Vollendung der Zytokinese eine wichtige Rolle spielt. Auch der Einfluss von PPAN auf die ganze Zelle und den Zellzyklus wird untersucht. Nach PPAN-knockdown werden weniger Zellen mit einem midbody detektiert. Es befinden sich nach knockdown von PPAN also weniger Zellen in der Zytokinese als in seiner Anwesenheit. Weiterhin nimmt die Anzahl der Zel [...]
doi:10.18725/oparu-34167
fatcat:n5wlwuopcjd3bgi4sbsshozn44