Radioimmunoassay of Human Serum Serotonin

B. Manz, H. Kosfeld, G. Harbauer, H. J. Grill, K. Pollow
1985 Clinical Chemistry and Laboratory Medicine  
A radioimmunoassay for extracted, N-acetylated human serum serotonin (5-hydroxytryptamine) is described. Antisera were raised in rabbits against a conjugate of bovine serum albumin with serotonin hemisuccinamide. Polyethylene glycol in combination with anti-rabbit immunoglobulins was used to separate bound and unbound ns \-Bolton Hunter-strolonin conjugate. Ethanol precipitation of serum proteins was used to extract serotonin, which was subsequently acetylated with acetic anhydride to N-acetyl
more » ... ydride to N-acetyl serotonin. The average recovery was 66%. The minimal detectable concentration of N-acetyl serotonin was 0.012 μηιοΐ/ΐ serum (25 fmol per tube). The intra-assay precision (CV) was 6.8% (n = 20) at a level of 0.9 ± 0.06 μιηοΐ/ΐ. The inter-assay CV was 10% at a level of 0.49 ± 0.049 μπιοΐ/ΐ, and 25% (n = 10) at a level of 2.16 ± 0.53. Analytical recovery of serotonin, corrected for losses during extraction and acetylation, was 99 ± 13%. The only substance cross-reacting with the antibody was endogenous N-acetyl serotonin. This was detectable when the acetylation Step was omitted, and it can be removed by extraction before the acetylation. The observed r nge for the concentration of serotonin in serum was for 59 women 0.45 -3.46 (mean + SD: 1.37 ± 0.63 μπιοΐ/ΐ) aiid for 59 men 0.19 -2.8 (mean ± SD: 1.18 ± 0.56 μιηοΐ/ΐ). All values are corrected for endogenous N-acetyl serotonin: observed r nge 0 -0.18 (mean ± SD: 0.03 ± 0.03 μηιοΐ/ΐ). Radioimmunologische Bestimmung des Serotonins in Humanserum Zusammenfassung: Wir beschreiben die radioimmunologische Bestimmung des extrahierten und N-acetylierten Serotoni s (5-Hydroxytryptamin) im Serum des Menschen. Antiseren wurden gegen das an Rinderserumalbumin gebundene Bernsteins uremonoamid-Derivat des Serotonins bei Kaninchen erzeugt. Polyethylenglycol und anti-Kaninchen Immimglobulin wurden zur Trennung des freien und gebundenen 125 I-markierten Serotonins verwendet. Serotonin wurde durch Ethanolfallung der Serumproteine extrahiert und anschlie end mit Essigs ureanhydrid zum N-Acetylserotonin acetyliert. Gesamtausbeute: 66%. Die Nachweisgrenze f r N-Acetylserotonin betr gt 0,012 μπιοΐ/ΐ Serum (25 fmol pro Assayr hrchen). Der Intra-Assay-Variationskoeffizient (VK> bei einer Serotoninkonzentrati n von 0,9 ± 0,06 μιηοΐ/ΐ betr gt 6,8% (n = 20), die Inter-Assay VK bei 0,49 ± 0,049 und 2,16 + 0,53 μηιοΐ/ΐ betragen 10 bzw. 25% (n = .10). K nstlich erh hte Serotoninkonzentrationen werden nach der Korrektur auf Extraktions-und Acetylierungsverluste zu 99 ± 13% wiedergefunden. Nur endogenes N-Acetylserotonin zeigt eine Kreuzreaktion mit dem Antik rper und kann durch Extraktion ohne Acetylierung nachgewiesen werden.
doi:10.1515/cclm.1985.23.10.657 fatcat:3qu3sulpyncnbbnbzhni7crf7i