Aos meus pais, Altamir e Arlete, com amor. AGRADECIMENTOS A Deus, meu guia e fortaleza em todos os momentos. A todos os meus pacientes, de quem recebi toda a confiança e para quem entrego toda minha dedicação. Ao meu orientador Rodrigo Tocantins Calado, agradeço a oportunidade, os incontáveis ensinamentos e toda a confiança em mim depositada. Ao seu lado, aprendi a ser mais paciente e a lidar com serenidade com os erros e obstáculos, procurando neles oportunidades de crescimento. Ao longo de 8

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... nos de convivência, minha admiração por sua competência, ética e dedicação só aumentaram. Aos meus professores Roberto Passeto Falcão, Belinda Pinto Simões, Eduardo Rego e Luciana Corrêa Oliveira de Oliveira, que, junto de meu orientador, ensinaram-me a arte da Hematologia. Aos meus professores Antônio Pazin Filho, Paulo Louzada Júnior e Sonir Roberto Rauber Antonini, que transformaram meu interesse por Clínica Médica em paixão. Ao meu professor de Português, Literatura e Filosofia, Antônio Fernando Costa, que me ofereceu as principais ferramentas científicas, filosóficas e morais, sobre as quais eu pude organizar todo o conhecimento posteriormente adquirido. A Maria Florência Tellechea e Bárbara Santana-Lemos, pelo incansável auxílio nas etapas mais penosas deste estudo. Seus ensinamentos de metodologia em cultivo celular foram essenciais para que eu pudesse trabalhar com confiança na bancada. A Maristela Orellana, Priscila Scheucher, Josiane Schiavinato, Fernanda Borges da Silva, Patrícia de Cássia Ruy, Manuela Karloh, Amélia Góes Araújo, Rita de Cássia dos Santos e Virgínia Wagatsuma, que não mediram esforços para me ajudar nas diversas etapas do projeto. Aos meus amigos e colegas de trabalho Tatiana Dias Marconi Monteiro, André Guedes Vieira e Fernanda Bion, com quem tive a oportunidade e orgulho de construir uma linda equipe de transplante de medula óssea. Aos meus queridos amigos Losaum, Arnold, Queca, Ziotti, Paulão e Daniel, meus irmãos de coração, pelo apoio inestimável. A minha irmã Paulinha, minha melhor amiga e maior inspiração. O seu exemplo foi o meu principal impulso para concluir este trabalho. A Camila, pelo amor incondicional. Compartilhar a vida contigo é meu maior privilégio. Aos meus pais, minhas maiores referências e a quem dedico este trabalho, agradeço sinceramente por tudo. ABSTRACT OLTRAMARI, M. R. P. Effect of purine derivative SR1 and pyrimido-indole derivative UM171 in the expansion of hematopoietic stem and progenitor cells in acquired aplastic anemia. 2020. 109pg. Thesis (Doctorate) -Ribeirão Preto Medical School -University of São Paulo, Ribeirão Preto-SP, 2020. Acquired aplastic anemia (aAA) is a disease characterized by bone marrow failure due to an immune destruction of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPC). The treatment continues to be a challenge, not only because of the acute complications of pancytopenia but also to the natural history of the disease and adverse effects of the existing therapies. Autologous transplantation of in vitro-expanded hematopoietic stem and progenitor cells (autologous HSCT) may improve the response to immunosuppressive treatment, making it less toxic. The usual culture conditions for in vitro HSPC expansion promotes substantial proliferation, but accompanied by a significant increase in cell differentiation. Two small molecules, SR1 and UM171, stand out as being capable of expanding human CD34 + cells in vitro, preserving stemness with minimal differentiation. The aim of this study was to evaluate the effects of SR1 and UM171 in in vitro-expanded CD34 + cells from aAA-patient bone marrow aspirates, on immunophenotypic expression, colony forming potential, telomere length, cytogenetic and gene expression profile. To this end, 22 bone marrow aspirate specimens were used: five from healthy individuals (control group); and seventeen from severe aAA patients (group AA). In contrast to SR1, UM171 was capable, in both groups, of expanding CD34 + cells, suppressing cell differentiation and, in particular, retaining the expression of the more primitive phenotypes CD90 -CD49f + and CD90 + CD49f + , although expansion effects were more pronounced in the control group. Excessive telomere shortening, clonal cytogenetic abnormalities, or altered transcriptomic profile of genes related to hematologic neoplasm development were not observed when cells were exposed to SR1 nor UM171. This study demonstrates UM171's property to suppress in vitro-expanded CD34 + cell differentiation from aAA patients, without inducing clonal transformation, thereby providing assurance to the translation of these results into clinical research. Keywords: Hematopoietic stem cell. SR1. UM171. Aplastic anemia. LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS AA -anemia aplástica AAa -anemia aplástica adquirida ATG -globulina anti-timocítica (do inglês anti-thymocyte globulin) BFU-E -unidade formadora de colônia eritroide precoce (do inglês burst forming unit erythroid) c-MPL -proteína da leucemia mieloproliferativa (do inglês myeloproliferative leukemia clade) cDNA -DNA complementar CDC42 -proteína de controle de divisão celular 42 (do inglês cell division control protein 42) CFU -unidade formadora de colônia (do inglês colony forming unit) CFU-GEMM -unidade formadora de colônia granulócito-monócito-eritrócito-megacariócito (do inglês colony forming unit granulocyte-erythrocyte-monocyte-megakaryocyte) CFU-GM -unidade formadora de colônia granulócito-monócito (do inglês colony forming unit granulocyte-monocyte) CNV -variação no número de cópias (do inglês copy number variation) CSA -ciclosporina CTH -célula-tronco hematopoética CTH-LD -célula-tronco hematopoética de longa duração CTH-CD -célula-tronco hematopoética de curta duração CTN -células totais nucleadas CTPH -célula-tronco e progenitora hematopoética DECH -doença do enxerto contra o hospedeiro DMSO -dimetilsulfóxido EPAG -eltrombopague EPCR -receptor endotelial de proteína C (do inglês endothelial protein C receptor) EPO -eritropoetina Figura 8 -Número absoluto (1) e relativo (2) de células expressando os fenótipos CD34 + 38 -