AGRADECIMENTOS Primeiramente quero agradecer a Deus por toda oportunidade, inspiração e força por esses últimos quatro anos. Minha vida se move na direção ao melhor, mesmo que em alguns momentos encontrei caminhos difíceis, mas sempre sabendo que estava seguindo a melhor direção. Á minha orientadora Dra. Angela, que sempre será para mim meu exemplo de paciência, otimismo e dedicação. Agradeço pela confiança que sempre depositou em mim durante esses 9 anos juntas. Não sei o caminho que o destino

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... me reserva nessa nova etapa, mas pode ter certeza que levarei comigo todos os seus ensinamentos. Á minha co-orientadora Dra. Tatiana Fraga, por toda paciência, dedicação e ensinamento. Obrigada por tudo. Á minha família amada, meus pais Nilson e Angelita, minhas irmãs Nadia e Larissa e meus sobrinhos Cassius e Benício você são a luz da vida, minha vida não faria nenhum sentido sem vocês do meu lado. Agradeço por todo incentivo e compreensão para que eu realizasse meu sonho. Amo vocês . Á minha amiga de graduação e de bancada Denize Monaris, responsável por ter seguido esse caminho, saiba que sou extremamente grata. Agradeço por todo o ensinamento, paciência, companhia, incentivo e por ter uma pessoa tão iluminada na minha vida. Á minha eterna "baby" Lídia Miragaia, minha companheira de bancada você não sabe a falta que sinto de você trabalhando do meu lado. Agradeço por toda paciência, amizade, viagens, risadas e incentivo. Obrigada minha "baby". Aos meus "topinhos" Afonso Abreu, Claudia Trigo e Fernanda Andrade. Vocês são extremamente essenciais na minha vida. Obrigada por toda amizade, conselhos, confidências, risos, choros, incentivos, diversão e carinho. Amo vocês. Á minha amiga Matilde Costa, minha nova companheira de banca e de muitas aventuras. Obrigada por toda amizade, risada, por me suporte nos meus momentos de estresse. Obrigada minha amiga. Aos meus amigos e companheiros do lab. 9 Demétria Fazolo, obrigada pela convivência, ensinamentos, ajudas e pelos momentos de descontração com muitas risadas. Aos meus amigos Lab. Bac., piratinhas e agregados e Thais Mitsunari vocês realmente fizeram todas a diferença em minha vida nesses últimos anos. Obrigada pelos bons cafés, nossas "uminhas" e nossas festas sucessos. Vocês moram no meu coração. Aos pesquisadores e funcionários do Laboratório de Bacteriologia do Instituto Butantan. Agradeço pela convivência com pessoas dedicadas e comprometidas com que fazem. Á Prof. Dra. Lourdes Isaac e todos os alunos do Laboratório de Sistema Complemento da USP. Agradeço pelos ensinamentos e por toda ajuda no que fosse preciso. Á Prof. Dra. Solange Serrano Instituto do Laboratório Especial de Toxinologia Aplicada -LETA -Instituto Butantan em especial aos seus alunos Milene Menezes, Ana Karina e Eduardo Kitano, por toda a paciência, ensinamentos e discussões durantes esses anos. Agradeço por toda ajuda prestada. Ao Prof. Marcos Bryan , Gisele, Antonio e Zenaide do Laboratório de Zoonoses Bacterianas, por toda auxílio prestado. Á todos os pesquisadores, funcionários e alunos do Departamento Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS) em especial ao Danival, por toda paciência e dedicação. Á FAPESP pelo apoio financeiro. ABSTRACT SILVA, L.B., Identification of Leptospira proteases involved in the degradation of extracellular matrix and plasma proteins. 2017. 66 f. Tese (Doutorado em Ciências) -Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Leptospires are highly motile spirochetes equipped with strategies for efficient invasion and dissemination within the host. Our group previously demonstrated that pathogenic leptospires secrete proteases capable of cleaving and inactivating key molecules of the human complement system, allowing these bacteria to circumvent host´s innate immune defense mechanisms. Given the successful dissemination of leptospires during infection, we wondered if such proteases would target a broader range of host molecules. In the present study, the proteolytic activity of secreted leptospiral proteases against a panel of extracellular matrix and plasma proteins was assessed. The culture supernatant of the virulent L. interrogans serovar Kennewicki strain Fromm degraded human fibrinogen, plasma fibronectin, collagen Type 1, and the proteoglycans decorin, biglycan, and lumican. Proteolytic activity was inhibited by 1,10-phenanthroline, suggesting the participation of metalloproteases. Laminin, matrigel, plasminogen and thrombin were not cleaved by proteases present in the supernatants. Moreover, production of proteases might be an important virulence determinant since cultureattenuated or saprophytic Leptospira did not display proteolytic acticity against ECM or plasma components. A search against Leptospira genomes allowed identification of four thermolysins, which are metalloproteases found exclusively in pathogenic species. One of them, encoded by LIC13322, was produced in the recombinant form and displayed proteolytic activity against fibrinogen, biglycan and decorin. Comparative exoproteomic analyses using Fromm and Patoc I strains were also performed and allowed identification of a few metalloproteases that could be involved in the degradation of host components. The ability to cleave connective tissue molecules and coagulation cascade proteins may certainly contribute to invasion and tissue destruction observed upon infection with Leptospira.