Padronização metodológica para determinação de proteínas de reserva de sementes de Handroanthus albus (Chamiso)

Marília Shibata, Cileide Maria Medeiros Coelho, Luciana Magda de Oliveira, Altamir Frederico Guidolin
2014 Revista de Ciências Agroveterinárias  
O sistema de eletroforese descontínuo contendo poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) é utilizado para separar cadeias polipeptídicas para posterior análise do perfil protéico. No entanto, as metodologias para extração e separação das proteínas em sementes variam conforme a espécie vegetal e pouco se relata a respeito de proteínas de reserva em Handroanthus albus. Desta forma, objetivou-se padronizar um método para extração e visualização do perfil protéico de sementes de H.
more » ... Testaram-se quatro metodologias em sistema de eletroforese SDS-PAGE, onde utilizou-se desde um tampão de extração simples, contendo apenas tris HCl, até um mais complexo com fortes antioxidantes. Realizaram-se, também, modificações na concentração dos géis, no tampão de amostra e no tampão dos eletrodos visando nitidez na visualização do perfil protéico. O método que permitiu a observação do melhor perfil protéico foi o que se baseou no uso de 1 M de tris HCl pH 8,8 no tampão de extração e 20% de glicerol; 1,73 mM de SDS; 1,54 mM tris-HCl-6,8; 0,036 mM azul de bromofenol e 2% de β-mercaptoetanol no tampão de amostra. O perfil protéico observado apresentou proteínas com peso molecular entre 63 kDa a 25,6 kDa em gel separador de 15% e o concentrador a 3%. Tal padronização metodológica serve de base para futuros trabalhos que objetivem estudar o perfil protéico associado a determinados eventos metabólicos e ou bioquímicos em semente de H. albus.
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