Análises morfoquantitativa e do código químico do receptor purinérgico P2X2 no plexo mioentérico do íleo de camundongos obesos fêmeas e machos (ob/ob) [thesis]

Márcia Sanae Mizuno
Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Morfofuncionais do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, para obtenção do Título de Doutor em Ciências. Área de concentração: Ciências Morfofuncionais Orientadora: Profa. Dra. Patrícia Castelucci São Paulo 2010 RESUMO MIZUNO, S. M. Análises morfoquantitativa e do código químico do receptor purinérgico P2X 2 no plexo mioentérico de camundongos obesos (ob/ob) fêmeas e machos. 150 f. Tese (Doutorado em Ciências
more » ... funcionais) -Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. As atividades intestinais são coordenadas pelo sistema nervoso entérico e, disfunções na motilidade intestinal são observadas em indivíduos obesos. O ATP é um co-transmissor e seus receptores estão distribuídos nos neurônios entéricos constituindo a família P2X e P2Y. O presente estudo tem como objetivo analisar a expressão do receptor P2X 2 e o código químico nos neurônios mioentéricos na obesidade. Foram utilizados íleo de camundongos obesos machos (OBM) e fêmeas (OBF) (C57BL/6J ob/ob), e controles (CF; CM) (+/+), que foram submetidos à técnica imuno-histoquímica de duplas marcações em neurônios imunomarcados ao receptor P2X 2 com NOS (inibitórios), ChAT (excitatórios) ou Calr (excitatórios e sensoriais). Resultados dos grupos CF e OBF: Foi verificado a imunomarcação ao receptor P2X 2 , NOS, ChAT e Calr no citoplasma e nas membranas celular e nuclear dos neurônios mioentéricos de ambos os grupos. As duplas marcações dos neurônios imunorreativos (-ir) ao receptor P2X 2 com NOS, ChAT ou Calr em CF foram 244%, 24±2% e 24±4%, e em OBF foram 19±4%, 25±4% e 22±1%, respectivamente. As duplas marcações dos neurônios NOSir, ChAT-ir ou Calr-ir com os neurônios receptor P2X 2 -ir foram 100% nos dois grupos. A densidade dos neurônios P2X 2 -ir aumentou em 62%, enquanto que a dos neurônios NOS-ir e ChAT-ir reduziram em 49% e 57%. A morfometria demonstrou aumento na área dos neurônios NOS-ir (CF 234±63, OBF 312±67); ChAT-ir (CF 210±24, OBF 253±14) e Calr-ir (CF 203±41, OBF 315±47), no entanto, neurônios P2X 2 -ir não apresentaram alterações (CF 325±23, OBF 336±67). A histoquímica demonstrou não haver diferença estatística entre os grupos quanto á densidade e a morfometria dos neurônios NADH-diaforase positivos. Resultados dos grupos CM e OBM: A expressão do receptor P2X 2 foi identificada somente em CM e a imunomarcação a NOS, ChAT e Calr nos dois grupos. Em CM as duplas marcações dos neurônios P2X 2 -ir com NOS-ir, ChAT-ir ou Calr-ir foram 233%, 345% e 326%, respectivamente, e nos neurônios NOS-ir, ChAT-ir e Calr-ir com o receptor P2X 2 foram 100%. A densidade dos neurônios NOS-ir e Calr-ir reduziram em 31% e 16%, enquanto que a densidade da população ChAT-ir aumentou 31%. A morfometria demonstrou que neurônios NOS-ir (CM 390±49, OBM 350±22); ChAT-ir (289±18, OBM 312±44), Calrir (CM 375±49, OBM 360±38) e P2X 2 -ir (CM 437±190) não apresentaram diferenças entre os grupos. A expressão protéica pela técnica do Western Blotting mostrou que houve uma redução de 36,5% no grupo OBM. Concluímos que neste modelo experimental tanto a obesidade (C57BL/6J ob/ob) como os gêneros podem contribuir com alterações: na expressão do receptor P2X 2 , na densidade e na morfologia dos neurônios NOS-ir, ChAT-ir e Calr-ir, promovendo mudanças nas atividades intestinais. Palavras-chave: Plexo mioentérico. Código químico. Obesidade. Receptor P2X 2. Morfologia. Camudongo ob/ob. ABSTRACT MIZUNO, S. M. Morfoquantitative and chemical coding analyses of the purinergic P2X 2 receptor in myenteric plexus of female and male obese mice (ob/ob). 150 p. Ph. D. Thesis (Ciências Morfofuncionais) -Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. The intestinal activities are coordinated by enteric nervous system, and dysfunctions in intestinal motility were observed in obese individuals. The enteric neurons have been demonstrated to express different purinergics receptors. This study aims to analyze the expression of P2X 2 receptor and the chemical code in the myenteric neurons in obesity. Sample from ileum of obese male (OBM) and females (OBF) (C57BL/6J ob/ob) and controls mice (CF, CM) (+/+) were used. Immunohistochemistry for double labelling in neurons P2X 2 receptor immunostained with NOS (inhibitory), ChAT (excitatory) or Calr (excitatory and sensory) was performed. Results of CF and OBF groups: immunostaining was verified for P2X 2 receptor, NOS, ChAT and Calr in the cytoplasm and in cell and nuclear membranes of myenteric neurons of both groups. The double-labelling for P2X 2 receptor/NOS, ChAT or Calr in CF were 24 ±4%, 24 ±2% and 24 ±4%, respectively, and in OBF were 19 ±4%, 25 ±4% and 22±1%. Inversely, NOS, ChAT or Calr/P2X 2 receptor immunoreactives neurons were 100% in both groups. The density of P2X 2 neurons showed an increase of 62%, whereas NOS and ChAT neurons decreased by 49% and 57%. In morphometric analysis showed an increase in NOS (CF 234 ± 63, 312 ± 67 OBF), ChAT (CF 210 ± 24, 253 ± 14 OBF) and Calr (CF 203 ± 41, 315 ± 47 OBF) neuronal area, however, P2X 2 neurons no changed in this feature (FC 325 ± 23, 336 ± 67 OBF). The histochemistry for NADH-diaphorase showed no statistical difference to density and morphometry of neurons between the groups. Results of CM and OBM groups: The P2X 2 receptor expression was identified only in CM. Immunostaining for NOS, ChAT and Calr were observed in both groups. The double-labelling observed in CM for P2X 2 receptor and NOS, ChAT or Calr were 23±3%, 34 ±5% and 32 ±6%, and inversely, NOS, ChAT or Calr/P2X 2 receptor immunoreactives neurons were 100%. The NOS and Calr neuronal density were reduced about 31% and 16%, while population ChAT neuronal density increased about 31%. The morphometry showed that NOS (CM 390 ± 49, 350 ± 22 OBM), ChAT (289 ± 18, 312 ± 44 OBM), Calr (CM 375 ± 49, 360 ± 38 OBM) and P2X 2 (CM 437 ± 190) neurons no differ between groups. The P2X 2 receptor protein expression by Western blotting showed that there was a reduction in 36.5% in OBM. We concluded that in this experimental model, both obesity (C57BL/6J ob/ob) and genders may contribute to changes in P2X 2 receptor expression, density and morphology of neurons NOS, ChAT and Calr, promoting alterations in intestinal activities.
doi:10.11606/t.42.2010.tde-05082010-100137 fatcat:pb6a36x5k5fhlhlc5qckvra6de