Использование микрокультурального иммуноферментного анализа для субтиповой идентификации циркулирующих вирусов гриппа А(Н1) и А(Н3)

В.З. Кривицкая, Е.В. Сорокин, Т.Р. Царева, Е.Р. Петрова, Н.И. Коновалова, М.М. Писарева, Ж.В. Бузицкая, Т.Д. Смирнова, А.А. Соминина
2015 Microbiology Independent Research journal  
Ключевые слова: микрокультуральный ИФА, вирусы гриппа, А(Н1N1)pdm09, А(Н3N2), моноклональные антитела, субтиповая дифференциация. Получена 5 июля 2015 г. Принята к печати 9 сентября 2015 г. Опубликована 13 октября 2015 г. АННОТАЦИЯ Разработан чувствительный вариант микрокультурального ИФА (cell-ELISA) для субтиповой дифференциации современных вирусов гриппа А(Н1N1)pdm09 и А(Н3N2), циркулирующих в человеческой популяции. Метод основан на оценке репродукции вируса в инфицированной культуре клеток
more » ... ной культуре клеток MDCK c использованием на стадии детекции cубтип-специфичных моноклональных антител (mAb), взаимодействующих с гемагглютинином (HA) вируса гриппа. При отработке метода использованы штаммы вирусов гриппа A, выделенные из клинических образцов в эпидемический сезон 2014 года. Показано, что при использовании mAb #1/#2 или #4 в концентрации 10-15 мкг/мл разработанный вариант cell-ELISA позволяет детектировать синтезируемый в зараженных клетках белок HA соответственно вирусов гриппа А(H3N2) или A(H1N1)pdm09. Разработанный метод может быть использован для идентификации современных штаммов вируса гриппа А в процессе их репродукции в клеточной культуре MDCK, что позволяет проводить субтипирование вирусов с низкой гемагглютинирующей активностью, когда невозможно использовать общепринятый метод -реакцию торможения гемагглютинации (РТГА). ABSTRACT The sensitive version of cell-ELISA was developed for the subtype-specific differentiation of current influenza A(H1N1)pdm09 and A(H3N2) viruses that are circulating in the human population. This method is based on the estimation of virus reproduction in the infected MDCK cells. The detection step of this method is an interaction of the subtype-specific monoclonal antibodies (mAbs) with the viral hemagglutinin (НА). The influenza A virus strains, isolated in 2014 epidemic season, were used to validate this method. It was shown that by using mAb # 1/ # 2 or # 4 at a concentration of 10-15 µg / ml the developed variant of cell-ELISA allows the detection of НА protein, synthesized in the cells infected with influenza A(H3N2) or A(H1N1)pdm09 virus, respectively. The developed method can be used for identification of HA subtype of modern influenza A viruses with low HA activity, which is not possible by the conventional hemagglutination inhibition test.
doi:10.18527/2500-2236-2015-2-1-39-43 fatcat:p2msbtjyobfofedl7jt5fdpwcm