pela paciência na orientação e no incentivo que tornaram possível a conclusão deste desafio. Еυ posso afirmar que a minha formação, inclusive pessoal, não teria sido a mesma sem a sua pessoa. À minha esposa Camila, pessoa com quem amo partilhar a vida. Obrigado pelo carinho, amor, pela paciência е pelo companheirismo. Sua presença significou segurança e a certeza de que não estou sozinho nessa caminhada. Ao meu filho Fernando, que embora não tivesse conhecimento disto, iluminou, de maneira

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... ial, os meus pensamentos, me levando a buscar sempre mais. Aos meus pais, Emilia e Fernando, que com muito carinho e apoio, não mediram esforços para que eu pudesse chegar até esta etapa da minha vida. Às minhas irmãs Suelen e Valesca, pelo eterno carinho e apoio. Ao meu amigo Vinícius, que retirou algumas pedras desse caminho antes da minha caminhada. Às irmãs Ana Carolina Dias Siqueira e Lara Cristina Dias, amigas mais que essenciais em todos os momentos. À Lilian, Adriana e Marina, pela amizade e pelo conhecimento técnico, sem o qual este estudo não seria possível. À Maria Helena (Lenucha), Maria de Fátima e Denny Marcos Garcia, pela presença na Casa 19 e a eterna disposição em ajudar. Aos Professores Jayter Silva de Paula, João Marcelo Fórtes Furtado e Peter Reinach, pelas conversas e orientações. Aos funcionários da Cirurgia Experimental da FMRP-USP, em especial aos técnicos Danniely N. S. Barros e Carlos (Carlinhos) e aos bioteristas Paulo R. Castilho e Ariane M. S. Santana, pela pronta disponibilidade. Aos funcionários do Departamento de Oftalmologia, Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeça e Pescoço da FMRP-USP, em especial à Maria Cecília Onofre, por toda orientação e pelo processamento do material. A todos aqueles que, de alguma forma, estiveram e estão próximos de mim, fazendo esta vida valer cada vez mais a pena. Epígrafe The highest reward for a person's toil is not what they get for it, but what they become by it. John Ruskin (1819 -1900) Apoio Financeiro À CAPES e FAPESP e ao NAP-FTO, pelo apoio financeiro, por toda colaboração e pelos serviços prestados a esta pesquisa. Resumo Resumo NOMINATO, L.F.R.S. Avaliação da transferência gênica por vetor viral na glândula lacrimal e resposta na neovascularização corneana. 2017. 57f. Tese (Doutorado) -Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2017. Objetivos: Os objetivos deste estudo foram: 1) determinar a eficácia da transferência gênica do vetor de adenovírus sorotipo 5, carreando o gene do receptor do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) solúvel humano (sVEGFR1) para a glândula lacrimal (GL); 2) investigar se a expressão de sVEGFR1 interfere na neovascularização da córnea (NVC), induzida por queimadura alcalina; 3) avaliar a segurança do procedimento. Métodos: Trinta e dois ratos Wistar foram submetidos à queimadura central da córnea direita com solução de hidróxido de sódio (NaOH) 1 M. Os animais foram divididos em três grupos e injetados diretamente em sua GL direita 25 μl de vetores virais AdVEGFR1 (1x10 10 pfu) (12 animais), 25 μl do vetor AdNull (1x10 10 pfu) (10 animais), ou 25 μl de solução salina (Controle). Após sete dias, a NVC foi observada e fotografada na lâmpada de fenda. A secreção lacrimal foi medida com fenol. A presença do sVEGFR1 na GL foi testada por qPCR (quantitative polymerase chain reaction) e a coloração, por imunofluorescência. O qPCR foi também utilizado para comparar o RNA mensageiro (RNAm) de ilterleucina-1beta (IL-1β), ilterleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) na GL e no gânglio do trigêmeo (GT). Resultados: O vetor AdVEGFR1 transfectou 83% dos ratos. O sVEGFR1 estava presente nas células acinares da GL. A NVC foi prevenida em nove de doze animais do grupo AdVEGFR1, em comparação com o grupo Ad-Null (3:10) e o grupo Controle (1:10) (p=0,0317). A secreção lacrimal e o RNAm das citocinas na GL e no GT foram semelhantes nos três grupos (p>0,05). Conclusões: A transferência gênica do vetor adenoviral para a GL demonstrou expressão local do sVEGFR1 humano, e evitou a NVC na maioria dos olhos expostos a queimaduras alcalinas, se mostrando seguro para a estrutura e função da GL. Palavras-chave: Terapia gênica. Neovascularização corneana. Glândula Lacrimal. Adenovírus. VEGF. sVEGFR1. Abstract Abstract NOMINATO, L.F.R.S. Evaluation of gene transfer by viral vector in the lacrimal gland and response to corneal neovascularization. 2017. 57f. Thesis (Doctoral). Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, Ribeirão Preto, 2017. Purpose: The aims of this study were: 1) to determine the efficacy of adenovirus vector serotype 5 (Ad) encoding human soluble VEGF receptor 1 (sVEGFR1) gene transfer to the lacrimal gland (LG); 2) to investigate whether expression of sVEGFR1 acts in corneal neovascularization (CNV), induced by alkali burn and; 3) to evaluate the safety of the procedure. Methods: AdVEGFR1viral vectors (25 μl, 1x10 10 pfu) were injected in the right LG of rats and compared with AdNull vector (25 μl, 1x10 10 pfu) or 25μl saline (Control) before cornea alkali burn with 1 M NaOH. After seven days, CNV was observed and photographed in the slit lamp. Tear secretion was measured with phenol red thread. The animals were tested for human VEGFR1 mRNA and protein in the LG by qPCR and immunofluorescence staining, respectively. qPCR was also used to compare the mRNA of IL-1β, IL-6, and TNF-α in LG and ipsilateral trigeminal ganglion (TG). Results: Ad-VEGFR1 transfected 83% of the rats. VEGFR1 was present in LG acinar cells. CNV was prevented in 9 of 12 animals of Ad-VEGFR1 group, compared to Ad-Null (3:10) and Control (1:10) (p=0.0317). The tear secretion and the cytokines mRNA in LG and TG were similar all three groups (p>0.05). Conclusion: Adenoviral vector gene transfer to LG as the has shown local expression of human sVEGFR1, as It prevented CNV in most of the eyes exposed to alkali burn and was safe for LG structure and function.