Paulo, como parte dos requisitos para a obtenção do título de doutor em Ciências Área de concentração: Química Analítica Orientador: Prof. Dr. Fernando M. Lanças São Carlos 2008 Aos meus pais, Ary de Souza Leite (in memoriam) e Elza Rebelo da Silva pelos constantes incentivos e compreensão em meus estudos, pela moral e ética que sempre me ensinaram e simplesmente pela minha existência... A minha filha, Camille, por ter me dado um novo sentido na vida; depois de você minha vida nunca mais foi a

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... esma. Serei eternamente grato pela sua existência. Dedico este trabalho com todo meu amor e carinho. AGRADECIMENTOS Ao Prof. Dr. Fernando Mauro Lanças, pela orientação e oportunidade de realizar este trabalho, não somente pela paciência e confiança em mim depositada, mas principalmente por "não me dar o peixe, mas me ensinar a pescar". Ao Prof. Dr. Gilberto Orivaldo Chierice e à Prof. Dra. Maria Eugênia Queiroz, pelas importantes sugestões apresentadas durante o Exame de Qualificação. Ao Sr. Mário W. Stelman, Vanderlei de Abreu e Rosangela Cristina Contieri de Camargo, pela oportunidade de realizar uma importante parte do trabalho no Centro de Pesquisa e Desenvolvimento da Biorigin. À CAPES, pelo apoio financeiro sem o qual não seria possível a realização deste trabalho. Aos meus colegas do Laboratório de Cromatografia, que mesmo distantes sempre serão lembrados com muito carinho. Ao Christian, Álvaro e Claudete, pela amizade e ajuda incondicionais quando precisei. À Odete Milão e Elaine Gobato, sempre prestativas e atenciosas, fundamentais na realização deste trabalho. Aos meus amigos do Centro de P&D da Biorigin: Larissa (grande ajuda no processo de formatação do trabalho), Moisés, William, Claudinha, Patrícia, Hevenilton, Regina, Regiane, PIM, João, Rosangelinha e Luzia Canute e as mais recentes Érica Arnosti, Fabiana, Ellen e Érica Durão. Aos meus colegas da minha primeira república: Daniel, Juliano e Ronaldo, que me ensinaram a sobreviver em uma Universidade Federal. Aos meus amigos José Ricardo, Alexandre Ataíde, William (cabelo), Ronaldo Nunes (Tony), Márcio Bergamini, que deixaram ótimas lembranças. E finalmente, mas não menos importante, às minhas irmãs Ariany, Juliana, Melina e aos meus sobrinhos Matheus, Vítor e Renata, por toda paciência e amor que têm comigo. RESUMO Este trabalho apresenta o desenvolvimento de métodos cromatográficos para a análise de Bisfosfonatos em medicamentos acabados, matérias-prima e em fluidos biológicos utilizando Cromatografia Iônica com detecção Indireta no UV e detecção por Condutividade com Supressão de Eluente. No capítulo 1, descreve-se a pesquisa bibliográfica das propriedades farmacológicas dos BP´s, suas principais rotas sintéticas e sobre os métodos analíticos apresentados na literatura científica. No capítulo 2, foi descrito o desenvolvimento de um método para a determinação dos BP´s etidronato, clodronato, pamidronato e alendronato em matéria-prima e para medicamentos de alendronato, utilizando Cromatografia Iônica e detecção indireta no Ultravioleta. O método foi aplicado na análise de medicamentos contendo alendronato em comprimidos de referência e em comprimidos genéricos. No capítulo 3, descreve-se estudos visando a determinação de etidronado em plasma humano, utilizando Cromatografia Iônica Multidimensional com detecção indireta no Ultravioleta. No capítulo 4, foi desenvolvido outro método para a determinação do BP´s etidronato, clodronato, pamidronato e alendronato em matéria-prima e em medicamentos contendo alendronato, utilizando Cromatografia Iônica e detecção por Condutividade com supressão de eluente. O método foi aplicado na análise de medicamentos contendo alendronato em comprimidos similares e em comprimidos manipulados. No capítulo 5, um método utilizando Cromatografia Iônica e detecção por Condutividade com supressão de eluente foi desenvolvida para determinar clodronato em urina humana. ABSTRACT This work presents the development of chromatografic methodologies for analysis of Bisphosphonates in drugs, raw material and biological fluids using Ion Chromatography with indirect UV detection and conductivity detection with eluent suppression. In chapter 1, an extensive bibliographical research was accomplished in relationship to the pharmacological properties of bisphosphonates, their more important synthetic routes and about the analytical methods presented in the scientific literature. In chapter 2, the development of a method was described for the determination of BP´s etidronate, clodronate, pamidronate and alendronate in raw material and for alendronate tablets, using Ionic Chromatography with indirect UV detection. The methodology was applied to the analysis of medicines containing alendronate in both forms, generic and reference. In chapter 3, studies conducted to determinate etidronate in human plasma, using Multidimensional ionic chromatography with indirect UV detection are decribed. In chapter 4, a methodology developed for the determination of etidronate, clodronate, pamidronate and alendronate in raw material and for alendronate tablets using ionic chromatography and detection for conductivity with eluente suppression is described. The methodology was applied in the analysis of medicines with alendronate generic and reference. In chapter 5, a methodology using ion chromatography and detection for conductivity with eluente suppression was developed and validated to determine clodronate in human urine.