Polimorfismos no gene da cobre, zinco -superóxido dismutase, estado nutricional relativo ao zinco e estresse oxidativo em pacientes com câncer da cavidade oral e orofaringe Dissertação para obtenção do grau de Mestre Orientador: Prof. Dr. Thomas Prates Ong Co-orientadora: Profa. Dra. Sílvia M. Franciscato Cozzolino São Paulo 2010 SUZANA BRESSAN Polimorfismos no gene da cobre, zinco -superóxido dismutase, estado nutricional relativo ao zinco e estresse oxidativo em pacientes com câncer da

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... e oral e orofaringe Dissertação para obtenção do grau de Mestre Orientador: Prof. Dr. Thomas Prates Ong Co-orientadora: Profa. Dra. Sílvia M. Franciscato Cozzolino São Paulo 2010 SUZANA BRESSAN Polimorfismos no gene da cobre, zinco -superóxido dismutase, estado nutricional relativo ao zinco e estresse oxidativo em pacientes com câncer da cavidade oral e orofaringe Comissão Julgadora Dissertação para obtenção do grau de Mestre Prof. Dr. Thomas Prates Ong (Orientador/Presidente) _________________________ 1° Examinador _________________________ 2° Examinador São Paulo, ___ de _________ 2010. DEDICATÓRIA À Deus, pois suas mãos me fizeram e me formaram. Os teus olhos viram o meu embrião; todos os dias determinados para mim foram escritos no teu livro antes de qualquer deles existir. Aos meus pais, por todo amor sincero, por terem acreditado em mim e lutado para permitir esse momento. À minha irmã, tão querida, que me faz refletir com suas palavras. Obrigada por todo amor e carinho. Ao meu amado sobrinho, que eu não tenho palavras para expressar o meu amor, é simplesmente um anjo que Deus colocou em minha família. Sendo ainda criança, sempre me surpreende com seu carinho sincero e sabedoria. À Professora, amiga e "mãe" Semíramis M. A. Domene que sempre estimulou em mim o desejo de fazer algo diferente e de uma forma especial. Sua sabedoria é única, e é uma pessoa que tenho como exemplo de força, dedicação e disciplina. À amiga e "mãe" Marlene que sempre foi um anjo em minha vida. Sempre me incentivou a acreditar e lutar por meus sonhos. E faz sempre questão de estar presente em todos os momentos da minha vida. Sou muito grata e honrada por tanto carinho e dedicação. Ao meu jovem amigo Yuri, que faleceu por câncer. À minha família inteira, meu bem mais valioso, que me justifica, me fortalece, me impulsiona e me conduz em todos os momentos da minha vida. AGRADECIMENTOS Ao Professor Thomas Prates Ong, que me aceitou e possibilitou a realização de um sonho. Obrigada pela paciência e por todos os conselhos de "pai". Desde a primeira conversa, percebi que se tratava de uma pessoa que merece respeito e admiração. À Professora Sílvia M. F. Cozzolino, por ter me orientado, por ser um exemplo de profissional e de caráter. É o tipo de pessoa que me impulsiona a seguir em frente com meu sonho, e que me deixa perplexa com sua sabedoria, capacidade e humildade. A Professora Inar Alves de Castro, por toda ajuda, atenção e colaboração para realização deste trabalho. Ao Professor Fernando Salvador Moreno, por todos os ensinamentos dedicados durante o mestrado e sugestões feitas no exame de qualificação. Ao Dr. Marcos Brasilino de Carvalho, pelo exemplo de humildade, pela dedicação com o projeto de pesquisa, por todas as reuniões e críticas construtivas feitas durante o desenvolvimento do trabalho e por toda contribuição no exame de qualificação. Ao Dr. José Francisco de Sales Chagas que sempre acreditou no trabalho e foi essencial para o desenvolvimento do trabalho realizado, sempre disposto a ajudar com a coleta de pacientes. Ao amigo Luis Antonio e toda a equipe de saúde do Departamento de Cirurgia de Cabeça e Pescoço do Hospital e Maternidade Celso Pierro. Obrigada por toda dedicação e empenho na seleção de participantes para realização do trabalho. À Dra. Adriana M. A. da Silva por todas as sugestões durante a elaboração do projeto de pesquisa, por todo entusiasmo na realização das análises. À Dra. Rosana S. Brasileiro, por ser exemplo de profissional, por toda ajuda no contato com os pacientes, e para realização do trabalho. Aos participantes da pesquisa. Obrigada por acreditarem no trabalho, pela compreensão, aprendizado e por serem exemplos de força e coragem. À professora Paula Andrea Martins, exemplo de humildade e dedicação. Obrigada pela amizade e incentivo. À professora Lilia Z. F. dos Santos, pela amizade, apoio e incentivo para buscar a realização dos meus sonhos. À professora Kátia C. P. McLellan, pela amizade, incentivo e exemplo de determinação. À professora Maria Angélica T. Medeiros, por todas as conversas, e por se emocionar junto comigo, no momento em que eu soube que havia passado na seleção do mestrado. À amiga Patrícia Borges Botelho, muito obrigada pela amizade, por me apoiar e por toda ajuda nas análises realizadas. Ao amigo Juvenal, obrigada pela amizade. À minha tia Isabel, que me alfabetizou na primeira série. Sempre me apoiou e acreditou em mim como uma mãe acredita em uma filha. Obrigada por todo amor, carinho e dedicação. Às primas Mari, Carol, Fê e Flávia, são como irmãs que estiveram comigo me apoiando. Obrigada por todos os momentos, por todas as palavras, por todo amor e carinho dedicado. Ao Rafael R. Watanabe, uma pessoa muito especial que tive o privilégio de conhecer. Obrigada por todo carinho, compreensão e sabedoria. À amiga Luciana S. Nishimura, que esteve comigo durante todo o período do mestrado, nas etapas de trabalho. Obrigada pela amizade, por todos os momentos de aprendizado e por toda dedicação. À amiga Liliane V. Pires, um anjo que ilumina o laboratório com sua luz. É um exemplo de amizade, perseverança e dedicação. À amiga Fernanda C. C. Guilherme, por sua amizade sincera, e seu jeito cuidadoso de uma irmã mais velha. À amiga Janaína, (Janis Joplin), pela amizade, alegria e carinho. As amigas, Kátia Callou e Kaluce Gonçalves, pela amizade e carinho sincero. Aos amigos do laboratório de Nutrição e Minerais, Ariana, Camila, Rafael, Bárbara, Cris e Maritsa, por todas as conversas, amizade, risadas, ajuda durante as análises no laboratório, e por serem exemplos de profissionais. Ao técnico do laboratório de Nutrição e Minerais Alexandre Pimental, por toda ajuda para realização do trabalho realizado, por todas as conversas e pela amizade. Aos alunos de iniciação científica, Estefan, Leila, Verônica, Luciene, e Graziela, por contribuírem com a realização do trabalho cotidiano e por deixarem o ambiente de trabalho mais agradável, alegre e harmonioso. As amigas do laboratório de Dieta, Nutrição e Câncer, Fábia, Juliana, Letícia e Roberta, por toda contribuição e amizade. À Lurdinha, por todas as conversas logo cedo. Obrigada pela amizade. Aos colaboradores Mônica, Cléo e Edilson, pela amizade e dedicação. Aos amigos do departamento de Alimentos e Nutrição Experimental que deixaram os dias mais alegres e que tornaram o ambiente de trabalho mais alegre. Aos amigos da família Carvalho e Juncioni, por toda ajuda, incentivo, carinho e amizade construída. Ao amigo Jean, do laboratório de Biologia Molecular do Hospital Heliópolis, pela amizade, por todas as discussões em relação ao projeto de pesquisa, por todos os ensinamentos, paciência e dedicação. À amiga Lili, do laboratório de Biologia Molecular do Hospital Heliópolis, pela amizade e dedicação durante a realização das análises. Ao amigo Marcelo, do laboratório de Biologia Molecular do Hospital Heliópolis, pela amizade, por todo empenho e dedicação com o projeto de pesquisa. À amiga Mariana, do laboratório de Biologia Molecular do Hospital Heliópolis, por toda amizade, carinho e ajuda com a seleção de novos pacientes. As amigas do laboratório de Biologia Molecular do Hospital Helipolis Diana, Ceci e Carol pelos agradáveis momentos durante as análises. A todas as minhas amigas e amigos que de alguma forma me apoiaram e me incentivaram. Aos docentes e colaboradores do departamento de alimentos e nutrição experimental da FCF/USP. À Elaine e Jorge da pós graduação, por todo auxílio e paciência desde o início do mestrado. Ao revisor da FAPESP, por todas as considerações feitas durante o mestrado. À agência de fomento FAPESP, pela bolsa para realização do mestrado. O consumo alimentar de Zn foi de 10,02 ± 4,81mg/dia [média ± desvio-padrão (dp)]. Observaram-se concentrações plasmáticas e eritrocitárias de Zn de 76,80 ± 23,77µg/dL e 44,26 ± 4,79 µg/g de hemoglobina (média ± dp); atividade da SOD total no eritrócito de 1.629,57 ± 675,25 U/g de hemoglobina (média ± dp); concentrações plasmáticas de malondialdeído (MDA) de 1,65 ± 0,58 nmol/dL (média ± dp); concentração de ORAC de 2607,89 ± 440,60 µmol TE/L. O SNP G2809A parece não ter influência no risco no câncer da cavidade oral e orofaringe. Os dados sugerem pacientes com câncer da cavidade oral e orofaringe apresentam deficiência no estado nutricional relativo ao Zn e aumento do estresse oxidativo. Palavras-chave: zinco, câncer de cabeça e pescoço, superóxido dismutase, polimorfismos, estado nutricional, estresse oxidativo, nutrigenômica. ABSTRACT BRESSAN, S. Polimorfismos no gene da Cu, Zn-superóxido dismutase, estado nutricional relativo ao Zn e estresse oxidativo em pacientes com câncer da cavidade oral e orofaringe. São Paulo, 2010. Defesa de Mestrado -Faculdade de Ciências Farmacêuticas -Universidade de São Paulo. Zinc (Zn) is a mineral with diverse biological functions. It is necessary for 300 enzymes, including Cu, Znsuperoxide dismutase (SOD1) that displays important roles in oxidative stress control and in carcinogenesis. Single nucleotide polymorphisms (SNP) in SOD1 gene could lead to increased oxidative stress and cancer development. We aimed at investigating the influence of the A35C (rs 2234694) and G2809A (rs 4998557) SNPs in SOD1 gene on oral and orofaryngeal cancer risk (Study I) and the association between these SNPs, Zn nutritional status and oxidative stress in oral and orofaryngeal cancer patientes (Study II). 169 men with oral and orofaryngeal cancer (cases) and 181 men without the disease (controls) were included in Study I. Genotype frequency distribution for SOD1 A35C was the following: 91% AA, 8% AC and 1% CC (cases). Genotype frequency distribution for SOD1 G2809A was the following: 66% GG, 29% GA and 5% AA (cases) and 62% GG, 34% GA and 4% AA (controls). 29 men with oral and orofaryngeal cancer were included in Study II. Dietary Zn consumption was 10,02 ± 4,8 mg/day. Zn plasma and eritrocyte concentrations were 76,80 ± 23,77µg/dL and 44,26 ± 4,79 µg/g hemoglobin; total SOD activity in the eritrocyte was 1.629,57 ± 675,25 U/g hemoglobin; malondialdehyde (MDA) plasmatic concentration was 1,65 ± 0,58 nmol/dL and ORAC was 2607,89 ± 440,60 µmol TE/L. SOD1 G2809A does not seem to increase oral and orofaryngeal cancer risk. Furthermore oral and orofaryngeal cancer patients seem to present deficiency in Zn nutritional status and increased oxidative stress.