Expressão, regulação e funcionalidade de genes HSPs no dermatófito Trichophyton rubrum [thesis]

Tiago Rinaldi Jacob
pela oportunidade, apoio, dedicação, confiança e carinho em todos os dias de minha existencia. Devo-lhes os mais dignos, justos e sinceros ensinamentos que pude aprender. Amo vocês! A minha avó Geny Miotto Rinaldi e tia-avó Aracy Miotto Elefante, por todos os momentos de agradável convívio, atenção e paciência. A meu avô Roberto Rinaldi (saudades) pela inspiração em tornar simples o que parece complexo. A minha namorada Tauana pelo apoio e compreensão em tantos momentos. A todos de minha
more » ... , que me apoiaram e torcem pelas realizações de meus ideais. A vocês eu dedico todas as conquistas da minha vida! Agradecimentos Primeiramente a Profa. Dra. Nilce Maria Martinez Rossi pela oportunidade e generosidade em oferecer-me seu laboratório, ensinamentos, atenção e dedicação durante a realização desse trabalho. Muito obrigado pela orientação, incentivos, apoio, experiências no exterior e compreensão, que foram fundamentais para meu crescimento profissional. Suas atitudes dignas, honestas e de comprometimento com a ciência foram muito válidas. Ao meu co-orientador Prof. Dr. Antonio Rossi pela oportunidade, ensinamentos, orientações no desenvolvimento dos experimentos e dedicação na confecção dos artigos científicos. Ao prof. Dr. Ademilson Espencer pelas oportunidades de congresso e estágio no exterior. A profa. Dra. Barbara Irene Kazmierczak e seu grupo pela recepção, atenção e dedicação durante meu período de estágio na Yale University. (Cuca), pelo apoio, convívio e colaborações científicas durante esses anos. Um agradecimento especial para Maíra Pompeu, pela colaboração durante a execução de certos experimentos e para Nalu Peres pelo apoio científico durante toda a realização do trabalho. Muito Obrigado nobres colegas! Ao Departamento de Genética da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto pela estrutura oferecida para minha formação na pós-graduação, em especial para as secretárias Susie Nalon e Silvia, sempre dispostas a ajudar. Ao CNPq pela bolsa de doutorado, a FAEPA pelos auxílios fornecidos para participação em congressos e a FAPESP pelo apoio financeiro dado ao projeto temático "Genômica funcional e comparativa em fungos". A disposição dos membros da banca examinadora para avaliar e discutir o presente trabalho. E especialmente a Deus por ter me proporcionado tantas oportunidades e momentos agradáveis com essas pessoas! RESUMO JACOB, T. R. Expressão, regulação e funcionalidade de genes hsps no dermatófito Trichophyton rubrum. 2013. 157 f. Tese (Doutorado) -Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto-SP, 2013. Palavras-chave: Trichophyton rubrum; Expressão gênica; Proteínas do choque térmico (HSPs); Hsp90; Fator de transcrição. ABSTRACT JACOB, T. R. Expression, regulation, and functionality of hsps genes in the dermatophyte Trichophyton rubrum. 2013. 157f. Tese (Doutorado) -Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto-SP, 2013. The dermatophyte Trichophyton rubrum is a filamentous, keratinophilic, and anthrophophilic fungi, being the major etiologic agent of cutaneous mycoses in humans. Its cosmopolitan distribution and the severe infection in immunocompromised patients make it one of the challenges to be faced by public health agencies worldwide. Hostpathogen interactions involve different processes related to keratin degradation and metabolic changes that allow adhesion and subsequent penetration of the infected tissue. These changes are important to the success of the infectious process and involve mechanisms that modulate gene expression, secretion of specific proteins, and metabolic adaptation, and cutaneous pH changes, essential to the establishment of the infection. Among the proteins that participate in the host-pathogen interaction are the heat shoch proteins (HSPs), related to diverse cellular processes. Thus, the hypothesis of this work was to evaluate whether T. rubrum hsp genes, as well as their major transcription factor (Hsf1), are involved in the response to adverse situations and in the interaction with the host microenvironment, and if these genes are regulated by the transcription fator PacC, a regulator of the pH signaling pathway. The expression of the hsp genes was evaluated in response to the cultivation of T. rubrum in different culture medium, during exposure to antifungal drugs, heat stress, and interaction with human nail and skin. The involvement of T. rubrum Hsp90 in the modulation of gene expression, susceptibility to antifungal drugs, and interaction with human nails was evaluated by using a chemical inhibitor, specific to this protein. Our results indicate a variable expression of the hsp genes, even among members of the same HSP family, in response to each environmental condition or interaction, to which the fungus was exposed. Furthermore, we have evidence that the hsp gene expression is modulated by the PacC transcription factor, by modulating the expression of the Hsf1 coding gene. We also found that Hsp90 is involved in T. rubrum susceptibility to the drugs Itraconazole and Micafungin, and in the development of this dermatophyte in human nails. These results reveal the involvement of HSPs in several aspects of T. rubrum metabolism, suggesting a role for Hsp90 in the pathogenicity and drug susceptibility in this dermatophyte.
doi:10.11606/t.17.2016.tde-15052014-105536 fatcat:3uzhorvlorhgfm2qxcdv5msija