Different conditions of covalent coupling of the CB.Hep-1 monoclonal antibody (MAb) to CNBr-Sepharose CL-4B were studied, with the aim of improving the performance of immunoaffinity chromatography for the purification of the recombinant hepatitis B virus surface antigen (rHBsAg). For this purpose, the immunosorbents containing 2.2, 3.2, 4.2, and 5.2 mg of CB.Hep-1 MAb/mL of gel were examined. The results showed that at a range of ligand density from 3.2 to 5.2 mg of CB.Hep-1 MAb/mL of gel the

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... tigen binding capacity was higher. Other parameters studied were coupling time, coupling pH and ligand concentration in the coupling buffer. Immobilization rates of 75, 120 and 180 min did not show significant differences either in the adsorption capacity or in the ligand leakage. The immunosorbents prepared at the coupling pH 10.0 showed a significant increment in the ligand leakage compared to those prepared at pH 8.3 and pH 9.0. When the concentrations of the CB.Hep-1 MAb in the coupling buffer were examined in terms of adsorption capacity, the highest value was achieved using the concentrations of 4.51–4.57 mg of CB.Hep-1 MAb/mL. In conclusion, the best conditions for the CB.Hep-1 coupling are 3.2–5.2 mg of CB.Hep-1 MAb/mL of gel, 120 min, pH 8.3 and concentrations of 4.51–4.57 mg CB.Hep-1 MAb/mL. RESUMEN Optimización del acoplamiento del anticuerpo monoclonal CB.Hep-1. Se estudiaron diferentes condiciones para la inmovilización covalente del anticuerpo monoclonal (AcM) CB.Hep-1 a un soporte Sepharose CL-4B activada con CNBr, con el objetivo de mejorar el funcionamiento de la cromatografía de inmunoafinidad para la purificación del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B recombinante (rHBsAg). Para este propósito, se evaluaron densidades de 2,2; 3,2; 4,2 y 5,2 mg de AcM CB.Hep-1/mL de gel. La capacidad de unión al antígeno fue más elevada en el rango de 3,2 a 5,2 mg de AcM CB.Hep-1/mL de gel. Se estudiaron otros parámetros como tiempo de acoplamiento, pH de acoplamiento y concentración del ligando en solución. El procedimiento de inmovilización ejecutado con tiempos de acoplamiento de 75, 120 y 180 min, no causó diferencias significativas en la capacidad de adsorción ni en el desprendimiento del ligando. Los inmunoadsorbentes preparados a pH de acoplamiento 10,0 mostraron un incremento significativo en el desprendimiento del ligando, mientras que a pH 8,3 y pH 9,0 no se observó una dependencia entre el pH y el desprendimiento del ligando. Los valores más altos de capacidad de adsorción se obtuvieron en un rango de concentraciones entre 4,51 y 4,57 mg de AcM CB.Hep-1/mL. En conclusión, las mejores condiciones para el acoplamiento del AcM CB.Hep-1 son: 3,2-5,2 mg de AcM CB.Hep-1/mL de gel, 120 min, pH 8,3 y concentraciones de 4,51-4,57 mg AcM CB.Hep-1/mL. Palabras claves: anticuerpo monoclonal, antígeno de superficie del virus de la hepatitis B recombinante, inmunoafinidad