Als Ausgangspunkt dieser Arbeit dienten die klinischen Studien EuroVacc01 und 02, bei denen gezeigt werden konnte, dass das getestete 97CN54 GagPolNef (GPN) Konstrukt in Kombination mit 97CN54 Env gp120 zwar gute Env-spezifische, aber nur in geringerem Umfang Gag-, Pol- und Nef-spezifische polyfunktionelle Antworten auf T-Zellebene induzierte. So waren die Studien hinsichtlich der Induktion Env-spezifischer Immunantworten ein Erfolg, hinsichtlich GPN wäre ein balancierteres Verhältnis der

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... antworten wünschenswerter gewesen. In dieser Arbeit sollte das GPN Konstrukt weiterentwickelt werden, um vor allem die in den Studien beobachteten schwachen Gag-spezifischen T-Zellantworten zu verstärken, ohne die Env-spezifischen Immunantworten zu beeinträchtigen. Die Modifikationen des Ausgangskonstrukts sollten i) die Wiederherstellung des Myristylierungssignals, ii) des viralen, ribosomalen Leserastersprungs und iii) der Aktivität der viralen Protease umfassen, um Partikelfreisetzung und Prozessierung des GPN-Polyproteins zu ermöglichen. Durch die verstärkte Freisetzung von GPN Partikeln sollte vor allem über cross-presentation die Immunogenität gesteigert werden. Während der Herstellung des modifizierten Konstrukts wurde festgestellt, dass das 97CN54 Pr55gag nicht in der Lage war, virus-ähnliche Partikel (VLP) zu bilden. Nach einem Aminosäurensequenzabgleich mit dem Gag des 97CN001 Virus, welches derselben Patientenprobe entstammt wie 97CN54, wurden 7 Aminosäuresubstitionen identifiziert, welche die Partikelbildung beeinträchtigen könnten. Aus diesem Grunde wurde das 97CN54 Gag im Konstrukt durch 97CN001 Gag ersetzt. Im Anschluss konnten die geplanten Konstrukte generiert werden, welche die gewünschten Eigenschaften aufwiesen. In Immunisierungsstudien mit Balb/C Mäusen wurde dann gezeigt, dass durch die Resubstitution des Myristylierungssignals am N-Terminus des Polyproteins und das Einfügen eines ribosomalen Leserastersprungs das GPN in seinen immunologischen Eigenschaften deutlich verbessert ist. Aufgrund einer nich [...]