The objective of this study was to assess the effects of antioxidant supplement (A), fetuin (F), aminoacid (AS) and cysteine (CY) on the sperm parameters, plasma membrane integrity, chromatin damage and antioxidant activities after freeze-thawing. Ejaculates were split into five aliquots and extended to a final concentration of 15x10 6 spermatozoa/ml with the Tris base extender containing 0.5 ml A, 2 mg/ml F, 13% AS, 5 mM CY and no additive (C). The extended samples were equlibrated slowly to

more »

... C during 4 h and then frozen using a digital freezing machine.. Frozen straws were thawed individually in water bath at 37°C for 30 s to analyse progressive motility and sperm motion characteristics as well as membrane integrity. Biochemical assays were performed in a spectrophotometer using commercial kits. Chromatin damage was evaluated by Comet Assay. A, F, AS and CY did not show better result on the percentages of post-thaw sperm motilities. CY exhibited the greatest value of plasma membrane integrity (P<0.05). Total abnormalities were greater in C and F (17.5±0.57%; 15.5±1.98%, respectively; P<0.05). F had greater chromatin damage results (P<0.05). GPx activity was affected by type of antioxidant, notably CY yielded the lowest results when compared to the other groups (P<0.05). In conclusion, although using antioxidants does not have any influence on the sperm motility after thawing, A, AS and CY cause reduction at abnormal spermatozoa; CY exhibits the greatest cryoprotective activity on plasma membrane integrity and F caused an increase at chromatin damage. Özet Bu çalışmanın amacı, sperma sulandırıcısına ilave edilen antioksidan suplementi (A), fetuin (F), aminoasit (AS) ve sisteinin (CY) dondurma çözündürme sonrası spermatolojik parametreler, plazma membran bütünlüğü, kromatin hasarı ve antioksidan aktivite üzerine etkilerini değerlendirmekti. Ejakülatlar 5 eşit parçaya ayrıldı ve mililitrede 15x10 6 spermatozoa olacak şekilde biri kontrol ve diğerleri 0.5 ml A, 2 mg/ml F, %13 AS ve 5 mM CY içeren Tris bazlı sperma sulandırıcısı ile sulandırıldı. Sulandırılan spermalar 4°C'de 4 saat süre ile ekülibre edildi ve otomatik sperma dondurma cihazı kullanılarak donduruldu. Dondurulan spermalar sıcak su banyosunda 37°C'de 30 saniye süre ile çözündürülerek plazma membran bütünlüğünün yanı sıra spermanın ileri yönlü hareketleri ve sperma hareket özellikleri değerlendirildi. Biyokimyasal analizler ticari kit kullanılarak spektrofotometrede yapıldı. Kromatin hasarı Comet Testi ile değerlendirildi. A, F, AS ve CY; ileri yönlü spermatozoa hareketi yönünden herhangi bir iyileştirici yönde sonuç göstermedi. Plazma membran bütünlüğü yönünden CY diğer gruplarla karşılaştırıldığında en yüksek değeri gösterdi (P<0.05). Toplam anormal spermatozoa oranı diğer gruplara oranla en yüksek C ve F (%17.5±0.57; %15.5±1.98, sırasıyla) gruplarında belirlendi (P<0.05). F en yüksek kromatin hasarını oluşturdu (P<0.05). GPx aktivitesi antioksidan tipinden etkilendi, diğer gruplarla karşılaştırıldığında özellikle CY en düşük sonuçları verdi (P<0.05). Sonuç olarak, kullanılan antioksidanlar dondurma çözündürme sonrası sperma motilitesi üzerine herhangi bir olumlu etki göstermemesine rağmen A, AS ve CY anormal spermatozoa oranının düşmesine neden oldu. CY plazma membran bütünlüğü yönünden en yüksek korumayı sağlarken, F kromatin hasarının artmasına neden oldu.