Βελτιστοποίηση πρωτεϊνικών δοκιμασιών για διαφοροδιάγνωση νευροεκφυλιστικών νόσων

Αθανασία Κωνσταντίνου Χατζηευσταθίου
2020
Η παρούσα μεταπτυχιακή εργασία είχε ως αντικείμενο μελέτης την ανάλυση δειγμάτων Εγκεφαλονωτιαίου Υγρού (ΕΝΥ) για την ποσοτικοποίηση επιλεγμένων πρωτεϊνικών βιοδεικτών με πιθανή διαγνωστική αξία. Σκοπός, είναι η βελτιστοποίηση και εκτίμηση της αποτελεσματικότητάς τους για τη διάγνωση νευροεκφυλιστικών διαταραχών, και πιο συγκεκριμένα της πιο κοινής νόσου prion του ανθρώπου (sporadic Creutzfeldt-Jacob Disease - sCJD) και παρκινσονικών συνδρόμων (Nόσος Parkinson - PD, Dementia with Lewy Bodies -
more » ... LB, Multiple System Atrophy - MSA). Χρησιμοποιήθηκαν δυο κοόρτες δειγμάτων που περιλάμβαναν, δείγματα ΕΝΥ ασθενών με υποψία της νόσου sCJD (συλλογή ΑΠΘ) και ασθενών με συνουκλεϊνοπάθειες (PD, MSA, DLB, συλλογή ΙΙΒΕΑΑ). Η πρωτεΐνη 14-3-3 και η πρωτεΐνη uPAR (urokinase-type Plasminogen Activator), εκτιμήθηκαν ως προς τη συμβολή τους στην αύξηση της βεβαιότητας διάγνωσης της sCJD. Η πιθανή διαγνωστική αξία της α-συνουκλεΐνης, της πρωτεΐνης tau και της YKL-40 εκτιμήθηκε σε παρκινσονσονικά σύνδρομα. Η πρωτεΐνη 14-3-3 ανιχνεύτηκε με ανοσοστύπωμα κατά Western. Οι υπόλοιποι βιοδείκτες ποσοτικοποιήθηκαν είτε με εφαρμογή μεθόδου ELISA (uPAR, α-συνουκλεΐνη), είτε με εφαρμογή της τεχνολογίας Luminex (α-συνουκλεΐνη, tau, YKL-40). H τεχνολογία Luminex που εφαρμόστηκε στηρίζεται στη χρήση παραμαγνητικών μικροσφαιριδίων, με χρωματική κωδικοποίηση, τα οποία είναι επικαλυμμένα με αντίσωμα έναντι του βιοδείκτη-στόχου, επιτρέποντας την ανοσοανίχνευση και ποσοτικοποίηση των υπό μελέτη πρωτεϊνικών μορίων. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν υποδηλώνουν την τάση ανίχνευσης υψηλότερων επιπέδων της uPAR σε ασθενείς με sCJD σε σχέση με δείγματα ελέγχου που προέρχονται από ασθενείς με άλλες νευρολογικές διαταραχές. Επιπρόσθετα, διαπιστώθηκε τάση διαφοροποίησης των επιπέδων της α-συνουκλεΐνης μεταξύ των κατηγοριών παρκινσονικών συνδρόμων που μελετήθηκαν. Ειδικότερα διαπιστώθηκε στατιστικά σημαντική διαφοροποίηση μεταξύ PD και MSA. Περαιτέρω μελέτες αξιοποιώντας μεγαλύτερο αριθμό δειγμάτων αναμένεται να συμβάλλουν στην ασφαλέστερη εκτίμηση της διαγνωστικής [...]
doi:10.26262/heal.auth.ir.324383 fatcat:crfq2mw4tbg2bbjmd5zbdab4ii