Vesículas secretadas por células, proteínas e miRNAs associados à competência oocitária em bovinos: um modelo retrospectivo no microambiente folicular [thesis]

Gabriella Mamede Andrade
AGRADECIMENTOS Ao longo do meu doutorado muitas pessoas colaboraram com o meu trabalho e com o meu crescimento profissional, serei eternamente grata a vocês e saibam, que têm um pouco de cada um de vocês nessa tese e em mim! Agradeço, de forma especial, ao meu orientador Prof. Dr. Felipe Perecin por tudo que aprendi com você e graças a você. Agradeço ainda a atenção, dedicação, paciência e incentivo, que foram com certeza, fundamentais durante esse trabalho. E ao meu coorientador Dr. Juliano
more » ... lho da Silviera, você foi essencial durante este trabalho, muito obrigada pela confiança, pela ajuda, pelas idéias e pelos conhecimentos divididos. Agradeço imensamente também: Ao Prof. Dr. Flávio Vieira Meireles, Dra. Fabiana Bressan a ajuda e colaboração de vocês foi fundamental. À USP e a FZEA agradeço a estrutura física para a realização deste trabalho e a disponibilidade de funcionários e técnicos. À CAPES, a FAPESP pela concessão da bolsa de doutorado e pelo suporte financeiro para realização deste trabalho. À Colorado State University e ao Prof. Dr. Gerrit J. Bouma obrigada pela oportunidade de fazer o intercâmbio, uma experiência profissional e pessoal indescritível. Aos colaboradores internacionais deste trabalho Dr. Dawid Tesfaye, Dr. Samuel Gebremedhn e Claudia Perini, a ajuda de vocês engrandece esse trabalho. Aos meus amigos e companheiros de laboratório: Maite, Léo e estagiários, é muito bom trabalhar com vocês. Obrigada pela ajuda diária, pelos ensinamentos e também pelos momentos de diversão. Aos meus amigos, aos meus familiares, à Marcella, ao Andre Jr, à Sofia e ao Ricardo saber que tenho vocês me traz paz, amor e felicidade. Aos meus pais por toda a ajuda e amor incondicional. Por fim, a todos que de alguma maneira me ajudaram e fizeram parte desta trajetória, muito obrigada! DEDICATÓRIA Àqueles que sempre fazem tudo por mim Viviane e Marcelo. ABSTRACT ANDRADE, G. M. Cell secreted vesicles, proteins and miRNAs associated to oocyte competence in bovine: a retrospective model in the folicular microenvironment. 2018. 175p. Ph.D. Thesis In vitro embryo production of is a widespread biotechnology worldwide. In 2015 Brazil was responsible for approximately 67% of bovine embryos produced in vitro in the world (PERRY, 2014). Although widely used, to develop strategies that lead to better use of oocytes and understand the mechanisms (in follicular microenvironment) that determine oocyte competence is of great interest to national market. The follicular microenvironment is fundamental for oocyte growth and acquisition of competence, making the oocyte able to develop and maintain the embryo until the embryonic maternal transition. For this end, the follicular components -granulosa cells, cumulus cells, oocytes and follicular fluid -need to work in unity, since they have arelation of interdependence. Within the mechanisms of communication existing within the follicular environment are vesicles secreted by cells, called extracellular vesicles, which were described in follicular fluid, containing bioactive material such as proteins, lipids and RNAs, including microRNAs. The components of follicular environment may reflect the quality of the oocyte that will be produced and the general hypothesis of this work is that the miRNAs present in the follicular environment regulate signaling pathways important for oocyte development and that the miRNAs and/or messenger RNAs present in the follicular cells can be explored as important tools for the diagnosis of oocyte quality. The first study determined profiles of miRNAs in granulosa cells, cumulus-oocyte complexes and extracellular vesicles derived from these cells and also in follicular fluid. In addition, by knowing the origin and role of miRNAs in the follicular environment, the expression profiles indicated the PI3K-Akt signaling pathway regulation in the follicular environment. In the second study, components of this signaling pathway were then determined in follicular cells associated with oocytes of high or low developmental competence. The results demonstrated that the activation of the PI3K-Akt pathway in follicular cells correlates with increased oocyte competence; conversely, the lower activity of this pathway in follicular cells is related to reduced oocyte competence. In studies three and four, experiments were performed to determine the profile of microRNAs and messenger RNAs in cumulus cells associated with oocytes of high or low developmental competence. Aiming to clarify some of the mechanisms responsible for the best oocyte quality that lead to the identification of oocyte quality biomarkers, allows the advancement and development of new tools to intensify the in vitro production of bovine embryos. Finally, results obtained demonstrate integrated responses between oocytes and follicular cells during follicular development and give new insights to the study of oocyte competence acquisition process and identified oocyte quality markers.
doi:10.11606/t.74.2018.tde-09042018-091451 fatcat:6nagiqxxijco3irk7jry4wtqoe