UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Facultad De Farmacia, Y Bioquímica, Unidad De Posgrado
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IV Listado de Cuadros Cuadro A.-Secuencias obtenidas de algunos miembros del genero Flavivirus con sus respectivos códigos de acceso disponibles en GenBank Cuadro B.-El análisis filogenético de las secuencias virales de la región NS5 del nuevo Flavivirus, resultaron agrupados significativamente con el virus Kedougou, formando un nuevo subclado. Cuadro C.-El análisis filogenético de las secuencias virales de la región ENV se agrupó con otras cepas que pertenecen a las especies de Flavivirus que
more » ... nfectan solo mosquitos, pero formaron un sub-grupo independientemente de los otros subclados, grupos Aedes y Culex V Resumen En los últimos años, un número de Flavivirus que se replican solamente en artrópodos se ha descubierto y caracterizado. En esta tesis, se describe el aislamiento y caracterización molecular de un nuevo Flavivirus únicamente de mosquito, aislado de Culex (Melanoconion) occossa colectados el 2009 de un área urbana de Iquitos, Perú, ubicada en la cuenca del Amazonas, en la región noreste del Perú. La evidencia del Flavivirus fue detectada mediante ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFI) en sobrenadante de cultivo celular de las células infectadas C6/36 usando anticuerpos policlonales grupo de Flavivirus y confirmada por RT-PCR. En comparación por pares de las secuencias de la región ENV, la más alta de nucleótidos (47,4%) y de aminoácidos (39,8%) la identidad se observó con el virus Nounané (NOUV). En comparación por pares de la región NS5, la identidad de nucleótidos más alta se observó con el virus Spondweni (65,9%), el virus de Iguape (IGUV; 65,7%) y el virus de Kedougou (65,6%); sin embargo, en el nivel de aminoácidos, la más alta identidad en pares de bases se observó con IGUV (69,8%), virus Naranjal (69,6%) y el virus Bussuquara (69,3%). El análisis filogenético utilizando ENV parcial y secuencias de aminoácidos NS5 reveló que este Flavivirus forma un clado con NOUV. Para investigar la gama de huéspedes del nuevo Flavivirus, se inocularon una variedad de células de mamíferos (Vero 76, Vero E6, BHK, LLCMK y MDCK) con el tercer pasaje del aislamiento C6/36 y monitoreamos el efecto citopático (EC). No se detectó EC, y todas las líneas de células de mamífero fueron negativas para el antígeno Flavivirus por IFI y ARN Flavivirus por RT-PCR luego de catorce días de incubación. Proponemos que este Flavivirus genéticamente diferente sea llamado Nanay Virus (NANV), debido de la zona de Iquitos, Perú, donde fue detectado por primera vez. Abstract In recent years, a number of Flaviviruses that replicate only in arthropods have been discovered and characterized. Herein, we describe the isolation and molecular characterization of a novel mosquito-only Flavivirus. The novel Flavivirus was isolated from Culex (Melanoconion) occossa mosquitoes collected in 2009 from an urban area of Iquitos, Peru, located in the Amazon basin in the northeastern region of the country. Evidence for a Flavivirus was detected by indirect immunofluorescent assay (IFA) in cell culture supernatant of infected C6/36 cells using polyclonal Flavivirus group antibodies and confirmed by RT-PCR. In pairwise comparison of the ENV region sequences, the highest nucleotide (47.4%) and amino acid (39.8%) identity was observed with Nounané virus (NOUV). In pairwise comparison of the NS5 region, the highest nucleotide identity was observed with Spondweni virus (65.9%), Iguape virus (IGUV; 65.7%) and Kedougou virus (65.6%); however, at the amino acid level, the highest pairwise identity was observed with IGUV (69.8%), Naranjal virus (69.6%) and Bussuquara virus (69.3%). Phylogenetic analysis using partial ENV and NS5 amino acid sequences revealed this Flavivirus forms a clade with NOUV. To investigate the host range of the novel Flavivirus, we inoculated a variety of mammalian cells (Vero 76, Vero E6, BHK, LLCMK, and MDCK) with pools of third passage C6/36 isolates and monitored for cytopathic effect (CPE). No CPE was detected, and all mammalian cells lines were negative for Flavivirus antigen by IFA and Flavivirus RNA by RT-PCR following fourteen days of incubation. We propose that this genetically distinct Flavivirus be named Nanay Virus (NANV), after the zone of Iquitos, Peru, where it was first detected.
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