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Análise in silico de Catepsina L-like de Leishmania braziliensis: busca de um novo alvo para o diagnóstico molecular

David Volfchuk Markus, Ryan Emiliano Silva, Jaciara de Oliveira Jorge Costa, Roberta Carvalho de Freitas Azevedo, Danilo Ciccone Miguel, Arlei Marcili
2020 Brazilian Journal of Development  
Análise in silico de Catepsina L-like de Leishmania braziliensis: busca de um novo alvo para o diagnóstico molecular Analysis in silico of Catepsin L-like of Leishmania braziliensis: search for new target for molecular diagnosis RESUMO A Leishmaniose Tegumentar Americana é uma importante zoonose causada por diferentes espécies de Leishmania, sendo Leishmania (Viannia) braziliensis a principal delas. Estes parasitos possuem animais silvestres e domésticos como reservatórios conhecidos. A forma
more » ... nhecidos. A forma tegumentar de Leishmaniose está difundida no território brasileiro e, apesar de acarretar um prognóstico menos grave do que a forma visceral, é de extrema importância por possuir potencial lesivo às mucosas e à pele, trazendo também uma grande carga emocional, afetando socialmente a vida dos pacientes. Neste estudo, realizamos a análise in silico das sequências de catepsina L-like a fim de padronizar um diagnóstico molecular sensível e específico para L. (V.) braziliensis. A busca por iniciadores para o diagnóstico molecular específico foi realizada investigando-se características físico-químicas e análise in silico da especificidade dos segmentos escolhidos através dos valores de similaridade com bancos de dados (Nucleotide Basic Local Alignment Search Tool (BLASTn)). Os resultados do delineamento in silico levaram à escolha dos seguintes iniciadores: CatLeishBF; CatLeishBR; CatLeishBLF; CatLeishBLR e Calbra. A análise in silico destes iniciadores demonstrou 100% de similaridade com L. (V.) brazilensis, não sendo observada complementaridade com sequências de outras espécies depositadas no banco de dados. Os testes in vitro, contudo, não apresentaram amplificações específicas. Novos estudos devem ser conduzidos a fim de aprimorarmos o diagnóstico das leishmanioses tegumentares para medidas terapêuticas mais efetivas e precoce. ABSTRACT American Tegumentary Leishmaniasis is an important zoonosis caused by different species of Leishmania, including leishmania (Viannia) braziliensis. These parasites have wild and domestic animals as known reservoirs. The tegumentary leishmaniasis is widespread in Brazil and, despite causing a less severe prognosis than the visceral form, it is extremely important because it has harmful potential to the mucous membranes and skin, also bringing a great emotional burden, socially affecting the lives of patients. In this study, we performed the analysis in silico of catepsin L-like to standardize a sensitive and specific molecular diagnosis for L. (V.) braziliensis. The search for primers for the specific molecular diagnosis was performed in silico analysis investigating physicochemical characteristics and specificity segments with values of similarity with databases (Nucleotide Basic Local Alignment Search Tool (BLASTn).) The results of in silico led to the choice of the following primers: CatLeishBF; CatLeishBR; CatLeishBLF; CatLeishBLR and Calbra. The in silico analysis of these primers demonstrated 100% similarity with L. (V.) brazilensis, and no complementarity was observed with sequences of other species deposited in GenBank. The in vitro tests, however, did not present specific amplifications. Further studies should be conducted in order to improve the diagnosis of tegumentary leishmaniasis for more effective and early therapeutic measures.
doi:10.34117/bjdv6n6-036 fatcat:abghizq5frf63ffsrzhjiivw7q